百日咳桿菌CpG-ODNs對變應性哮喘小鼠Toll信號分子的實驗研究.pdf

1、變應性哮喘是以IgE過量合成、嗜酸性粒細胞和肥大細胞浸潤、氣道高反應性及氣道重塑為主要特征的慢性氣道炎癥。哮喘發(fā)病率逐年上升，嚴重影響患者日常生活，有時甚至是致命的。近年來研究發(fā)現(xiàn)，變應性哮喘是一種Th1/Th2反應失衡的呼吸道疾病，哮喘病程中，Th2反應占主導作用，產(chǎn)生Th2類細胞因子從而阻抗Th1反應，介導了嗜酸性粒細胞炎癥及B細胞分泌IgE過程，調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡調(diào)控哮喘已成為公認的治療方法。
　　 百日咳桿菌為一類致

2、病微生物，可誘發(fā)百日咳疾病。近年來醫(yī)學工作者將滅活百日咳桿菌疫苗，白喉疫苗及破傷風疫苗合用形成百白破聯(lián)用疫苗，以預防這三類疾病。也有研究發(fā)現(xiàn)滅活百日咳桿菌為一種Th1反應刺激劑，可產(chǎn)生防治變應性疾病作用。進一步研究發(fā)現(xiàn)滅活全細胞百日咳桿菌對小鼠變應性哮喘具有治療作用，這可能與其中包含抗變應性哮喘活性的CpG-ODNs有關。
　　 非甲基化含CpG基序寡核苷酸單鏈(unmethylated CpG motif containing

3、oligo deoxy nucleotides，簡稱CpG-ODNs)為一類具有抗變應性疾病活性的DNA序列。目前研究發(fā)現(xiàn)4種亞型，即A型-D型。脊椎動物含有無活性的甲基化CpG-ODNs，無脊椎動物含有有活性的非甲基化CpG-ODNs。CpG-ODNs進入機體后，以胞吞作用進入細胞，與細胞內(nèi)體中TOLL樣受體-9(TLR-9)結合，激活TLR共刺激通路，誘導核因子(AP-1，NF-kappaB)轉錄，促進Th1細胞因子合成，抑制Th2

4、型細胞因子分泌，使哮喘中失衡的Th1/Th2反應恢復平衡，產(chǎn)生調(diào)節(jié)變應性哮喘作用。
　　 前期研究主要涉及給予變應性哮喘小鼠滅活百日咳桿菌，對其調(diào)節(jié)變應性哮喘機制進行評價。結果發(fā)現(xiàn)給藥后哮喘小鼠BALF中炎癥細胞數(shù)下降，且外周血中IL-4/IFN-γ恢復平衡，具有一定調(diào)節(jié)變應性哮喘機制的作用，這種作用可能由菌體內(nèi)的CpG-ODNs產(chǎn)生，但對百日咳桿菌CpG-ODNs防治哮喘的機制研究未見報道。本研究基于前期研究，應用軟件獲取9條

5、百日咳桿菌CpG-ODNs，進行抑制炎癥細胞反應實驗，篩選出抑制炎癥細胞最佳CpG-ODNs序列seq A。后續(xù)研究中應用seqA給予OVA致敏小鼠慢性哮喘模型，檢測其對變應性哮喘小鼠肺泡灌洗液(BALF)中Th1/Th2細胞因子(IFN-γ/IL-4)及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)產(chǎn)生量的影響，并通過RT-PCR和western blot法分別檢測小鼠脾細胞TLR-9 mRNA及肺組織TLR-9蛋白表達量。結果發(fā)現(xiàn)，seq A抑制炎癥

6、細胞效果最佳，其能夠提高小鼠慢性哮喘模型BALF中IFN-γ含量，抑制IL-4含量；但對VEGF作用并不明顯。且其能夠有效上調(diào)小鼠脾細胞TLR-9 mRNA和肺組織TLR-9蛋白表達量，所有實驗組中腹腔注射(ip)組均優(yōu)于灌胃(ig)組。結果表明，百日咳桿菌CpG-ODNs具有抑制炎癥細胞活性，seq A能夠有效調(diào)節(jié)Th1/Th2反應，且其對TLR-9具有上調(diào)作用，證明這種活性與激活TLR-9信號通路有關，實驗發(fā)現(xiàn)給予CpG-ODNs時