聯(lián)合應(yīng)用百日咳毒素誘導(dǎo)大鼠自身免疫性內(nèi)耳病的實驗研究.pdf

1、目的：建立Sprague-Dawley （SD）大鼠自身免疫性內(nèi)耳?。ˋIED）的動物模型，其具有高陽性率、可復(fù)制、更類似疾病病理生理過程且適合進(jìn)一步免疫學(xué)研究的特點，并探尋導(dǎo)致大鼠AIED的主要內(nèi)耳抗原成分。
　　 方法：96只SD 大鼠被隨機(jī)分為4組：CIEAg/CFA+PT、CIEAg/CFA、PT和PBS組，每組24只。4組大鼠或接受皮下注射由粗制內(nèi)耳抗原（CIEAg）與等量的完全福氏佐劑（CFA）充分混合的乳化液，并同

2、時在腹腔內(nèi)注射百日咳毒素（PT）500ng，或僅皮下注射CIEAg+CFA，或僅腹腔內(nèi)注射PT 500ng，或僅注射PBS。檢測大鼠ABR 閾值評估聽覺功能，內(nèi)耳切片蘇木素-伊紅（H-E）染色，光鏡觀察內(nèi)耳形態(tài)學(xué)改變，并用免疫組化方法檢測大鼠血清抗CIEAg的抗體及鑒定內(nèi)耳的浸潤細(xì)胞。Wes t er n bol t 試驗對比分析AIED模型動物中自發(fā)恢復(fù)的與持續(xù)疾病狀態(tài)的動物血清針對大鼠不同內(nèi)耳抗原成分免疫反應(yīng)的差異，從而找出可能導(dǎo)致

3、大鼠AIED的主要內(nèi)耳抗原。
　　 結(jié)果：大鼠免疫后，CIEAg/CFA+PT組的ABR 閾值較其他3組顯著提高，該組大鼠的時間動態(tài)的ABR 閾值也有統(tǒng)計學(xué)差異。免疫后7d，50％的大鼠出現(xiàn)聽力下降；到14d 時，100％動物出現(xiàn)聽力損失，且ABR 閾值達(dá)到峰值（58.3±6.1 dB SPL）；大鼠免疫后，CIEAg/CFA+PT組的內(nèi)耳炎性細(xì)胞浸潤的時間動態(tài)的平均得分也有顯著差異。免疫后7d 即有67％的動物內(nèi)耳有炎性細(xì)胞浸

4、潤，到免疫后14d 最為明顯，100％動物出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤，且內(nèi)耳浸潤的炎性細(xì)胞的平均得分達(dá)峰值（2.3±0.5），隨后，快速減少。在實驗后期還可觀察到外毛細(xì)胞丟失、螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞退化、內(nèi)淋巴積水等病理學(xué)改變。免疫后14d 開始，CIEAg+CFA+PT 大鼠血清中出現(xiàn)針對Corti 氏器，血管紋，螺旋韌帶及螺旋緣等處的強(qiáng)陽性反應(yīng)，而在CIEAg+CFA組僅部分大鼠發(fā)生極微弱的陽性反應(yīng)，其他2組及陰性對照未見上述反應(yīng)。免疫后7d 即可觀

5、察到CD4+T 浸潤到內(nèi)耳，且在隨后的時間觀察點都存在。其他3組大鼠沒有聽閾或內(nèi)耳形態(tài)學(xué)改變。Western bolt 實驗顯示AIED模型動物中持續(xù)疾病狀態(tài)的動物血清中出現(xiàn)針對分子量為68kDa、58kDa、42kDa、28kDa 蛋白成分的反應(yīng)條帶，而在自發(fā)恢復(fù)的動物血清中沒有顯示有針對上述分子量蛋白分子的反應(yīng)條帶。
　　 結(jié)論：通過皮下單次注射CIEAg+CFA 乳化液并聯(lián)合應(yīng)用高劑量PT，可成功建立SD 大鼠AIED 動