抑制JNK信號(hào)通路調(diào)控APP代謝及Aβ生成的作用及其機(jī)制.pdf

1、【目的】已有的研究表明，c-Jun N-末端激酶（JNK）的激活可能參與了阿爾茨海默病（Alzheimer's disease，AD）多個(gè)主要病理損害過程。然而，在成年轉(zhuǎn)基因AD小鼠模型中特異性抑制JNK的活性，能否防止AD病變的進(jìn)展仍未闡明。
　　本實(shí)驗(yàn)以成年APPswe/PS1dE9轉(zhuǎn)基因AD小鼠為研究對(duì)象，使用JNK特異性小分子激酶抑制劑SP600125，探討其對(duì)AD轉(zhuǎn)基因小鼠認(rèn)知功能障礙、腦內(nèi)Aβ產(chǎn)生及沉積、Tau蛋白磷酸

2、化的治療作用及其相關(guān)機(jī)制。
　　【材料方法】以雌性APPswe/PS1dE9轉(zhuǎn)基因AD小鼠及與其相匹配的非轉(zhuǎn)基因野生型C57小鼠（WT）為研究對(duì)象，使用SP600125腹腔內(nèi)注射12周后斷頭取腦。分別采用免疫組化染色和熒光染色方法檢測(cè)Aβ彌漫性淀粉樣斑塊和纖維性斑塊的沉積情況；采用ELISA方法檢測(cè)腦組織中可溶性和不可溶性Aβ1-40、Aβ1-42及Aβ寡聚體的含量變化情況；采用Western blot方法檢測(cè)Tau蛋白磷酸化及影

3、響Aβ和Tau蛋白產(chǎn)生的各種酶類的表達(dá)變化情況。
　　【結(jié)果】1、以WT小鼠為對(duì)照，APPswe/PS1dE9轉(zhuǎn)基因AD小鼠大腦皮質(zhì)和海馬中APP、過磷酸化APP（p-APP）及磷酸化JNK（p-JNK）的表達(dá)水平均顯著增加；以PBS溶媒治療的APPswe/PS1dE9轉(zhuǎn)基因AD小鼠對(duì)照組相比，使用JNK特異性小分子激酶抑制劑SP600125治療后，可以顯著降低p-APP和p-JNK的含量。2、與PBS溶媒治療對(duì)照組相比，使用SP

4、600125治療可以顯著改善APPswe/PS1dE9轉(zhuǎn)基因AD小鼠的空間學(xué)習(xí)和記憶功能。3、在APP相關(guān)代謝研究中，與PBS溶媒治療對(duì)照組相比，使用SP600125治療可以明顯增加APPswe/PS1dE9轉(zhuǎn)基因AD小鼠大腦皮層和海馬組織中ADAM10（α-分泌酶主要成分）的表達(dá)，顯著降低BACE1（β-分泌酶主要成分）和P S1（γ-分泌酶主要成分）的表達(dá)；進(jìn)而明顯增加α-分泌酶裂解產(chǎn)物——可溶性APPα（sAPPα）的含量，同時(shí)顯

5、著降低β-分泌酶裂解產(chǎn)物——可溶性APPβ（sAPPβ）的含量；最終顯著降低轉(zhuǎn)基因AD小鼠大腦皮質(zhì)和海馬中可溶性及不可溶性Aβ1-40、Aβ1-42和Aβ寡聚體的含量及其沉積；而對(duì)腦啡肽酶（NEP）和胰島素降解酶（IDE）等Aβ相關(guān)降解酶的表達(dá)均無顯著影響。4、在Tau蛋白的研究中，與PBS溶媒治療對(duì)照組相比，使用 SP600125治療可以明顯降低APPswe/PS1dE9轉(zhuǎn)基因AD小鼠大腦皮層和海馬組織中Thr205及Ser235位點(diǎn)

6、過磷酸化Tau蛋白的含量；而對(duì)于可能促進(jìn)Tau蛋白磷酸化的CDK5和GSK3β的表達(dá)并無顯著影響。
　　【結(jié)論】使用JNK特異性小分子激酶抑制劑SP600125治療APPswe/PS1dE9轉(zhuǎn)基因AD小鼠，可以通過抑制JNK活性顯著降低磷酸化Tau蛋白含量，并通過減少APP過磷酸化、促進(jìn)α-分泌酶裂解并抑制β-分泌酶裂解APP過程，進(jìn)而顯著降低Aβ的含量及其沉積，改善轉(zhuǎn)基因AD小鼠的空間學(xué)習(xí)和記憶功能。表明使用SP600125治療