格隆溴銨經(jīng)JNK-NF-κB信號通路抑制香煙誘導(dǎo)的肺部炎癥機(jī)制.pdf

1、目的:慢性阻塞性肺部疾病(COPD)，是一種不完全可逆的氣流受限特征的可預(yù)可治的疾病。吸煙是慢性阻塞性肺部疾病(COPD)的主要致病因素之一。香煙含有大量的氧化物質(zhì)，如醛類、尼古丁等，可以導(dǎo)致肺上皮細(xì)胞氧化損傷，釋放一系列炎癥因子，進(jìn)而產(chǎn)生肺功能障礙。格隆溴銨(Gly)是一種被證實(shí)了的毒蕈堿受體拮抗劑，具有很強(qiáng)的支氣管擴(kuò)張作用。本實(shí)驗(yàn)以香煙煙霧(CS)暴露的小鼠和香煙提取物(CSE)刺激的肺上皮細(xì)胞(A549)為模型，研究Gly對香煙煙

2、霧引起的小鼠中提狀態(tài)下肺部炎癥的抑制作用，并通過細(xì)胞模型探討Gly抑制肺部炎癥作用的信號分子機(jī)制。
　　方法:整體實(shí)驗(yàn)，采用ICR小鼠，將小鼠隨機(jī)分為空白組，模型組;模型組分格隆溴銨低、中、高劑量組(150，300，600μg/ml)與噻托溴銨陽性對照組(Tio，300μg/ml)及地塞米松陽性對照組(Dex，1 mg/kg)，分別給藥干預(yù)，每天氣霧給藥5 min，1h后進(jìn)行連續(xù)四天香煙暴露，每天的煙量為7，7，9，11支，第五天

3、處死小鼠，計(jì)數(shù)肺泡灌洗液(BALF)中白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)、巨噬細(xì)胞數(shù)和淋巴細(xì)胞數(shù);過氧化物髓化酶(MPO)活力和谷胱甘肽(GSH)水平;以及ELISA檢測BALF中炎癥細(xì)胞因子:白介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子β(TNF-β)[12,13]、白介素8（IL-8）[14]、轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)，取左上肺制備組織勻漿，用Real-time PCR方法測定肺組織勻漿中炎癥因子的表達(dá);左下肺制作組織切片，分別進(jìn)行免疫組化和

4、HE染色檢測。離體實(shí)驗(yàn)，用香煙提取物CSE刺激肺上皮細(xì)胞A549細(xì)胞，誘導(dǎo)上皮細(xì)胞炎癥因子表達(dá)和蛋白釋放增加;采用Gly預(yù)處理，研究Gly在CSE誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中的調(diào)節(jié)作用并探討其作用的可能信號通路。
　　結(jié)果:
　　(1) Gly可減輕吸煙誘導(dǎo)的肺部炎癥:在整體實(shí)驗(yàn)中，氣霧給予不同劑量的Gly均能有效地減少由香煙引起的BALF中白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞數(shù)增多，下調(diào)肺組織中炎癥因子IL-1β、TNF-α、IL-8、TGF

5、-β的高表達(dá)，與模型組比較差異有顯著性，且呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系:香煙暴露小鼠體內(nèi)的GSH水平明顯下降，MPO活性明顯上升;Gly使GSH水平升高，并使MPO活性下降與模型組比較差異有顯著性;肺組織免疫組化結(jié)果表明，小鼠香煙暴露之后，MMP-9高表達(dá)而TIMP-1表達(dá)下降，Gly可逆轉(zhuǎn)這兩種蛋白的表達(dá)，與模型組比較差異有顯著性。
　　(2)離體實(shí)驗(yàn)中，CSE刺激A549細(xì)胞24 h能夠引起TGF-β1和MMP-9表達(dá)升高，TIMP-1