經(jīng)ALSS治療的乙肝肝衰竭患者的尿液代謝組學(xué)研究.pdf

1、利用以超高效液相色譜.質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UPLC/MS)為基礎(chǔ)的尿液代謝組學(xué)研究方法對接受了非生物型人工肝臟支持系統(tǒng)(ALSS)治療的乙肝肝衰竭患者進(jìn)行尿液代謝組學(xué)研究。評估乙肝肝衰竭患者與正常對照間的尿液代謝譜差異;探討ALSS治療對乙肝肝衰竭患者尿液代謝譜的影響;評估不同預(yù)后的乙肝肝衰竭患者間尿液代謝譜的差異并建立預(yù)后判斷模型。
　　 研究方法：
　　 篩選接受了ALSS治療的乙肝肝衰竭患者,收集尿液標(biāo)本并進(jìn)行3個月轉(zhuǎn)歸

2、情況的隨訪;考察超高效液相色譜以及四級桿-飛行時間質(zhì)譜儀的參數(shù)設(shè)置;對同一樣本重復(fù)檢測,考察儀器的重復(fù)性和穩(wěn)定性;對UPLC/MS的檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行多變量數(shù)據(jù)分析,采用模式識別技術(shù)考察尿液代謝譜的組間差異,篩選生物標(biāo)記物,建立預(yù)后判斷模型并與終末期肝病模型(MELD)進(jìn)行比較。
　　 研究結(jié)果：
　　 建立了穩(wěn)定可靠的采用UPLC/MS進(jìn)行乙肝肝衰竭患者尿液代謝組學(xué)研究的方法。對乙肝肝衰竭組和正常對照組的尿液代謝信息進(jìn)行多變

3、量分析,發(fā)現(xiàn)尿液代謝組學(xué)數(shù)據(jù)可將對照組和乙肝肝衰竭患者分別聚類區(qū)分。鑒定了對分組貢獻(xiàn)較大的五類物質(zhì),分別是肌酸酐、肉毒堿、α-N-苯乙酰-L-谷氨酰胺(PAGN)、馬尿酸以及甜菜堿。這五類物質(zhì)在患者尿液中的含量均顯著低于對照組,提示乙肝肝衰竭患者腎功能以及肝臟的脂類、氨基酸的代謝功能異常。
　　 ALSS治療前后的尿液代謝譜有顯著的不同,可分別聚類于不同的區(qū)域中。尿液中的PAGN是NH3的排泄載體,其含量在ALSS治療后降低明顯

4、,提示ALSS治療可顯著降低乙肝肝衰竭患者的血氨水平。
　　 好轉(zhuǎn)組和惡化組患者經(jīng)多變量數(shù)據(jù)分析分別聚類,表明代謝組學(xué)技術(shù)可作為一種新的技術(shù)手段應(yīng)用于乙肝肝衰竭患者預(yù)后判斷的研究。兩組患者間差異最顯著的代謝物質(zhì)分別是肌酸酐和甘氨鵝脫氧膽酸。二者在惡化組患者尿液中的含量均明顯低于好轉(zhuǎn)組患者,提示惡化組患者膽固醇代謝以及腎功能的受損均較好轉(zhuǎn)組患者嚴(yán)重。另外,甘氨鵝脫氧膽酸在兩次ALSS治療前后的變化程度在兩組不同預(yù)后患者間的差異有顯

5、著統(tǒng)計學(xué)意義,提示甘氨鵝脫氧膽酸在ALSS治療過程中的特異性變化可能有助于對乙肝肝衰竭患者預(yù)后的判斷。
　　 不同預(yù)后的兩組乙肝肝衰竭患者間,其第一次ALSS治療后48-72小時的尿液代謝譜的差異較其他四個時間點大。以含量在兩組不同預(yù)后患者間有顯著差異(P＜0.05)的901個變量建立新的雙向正交偏最小二乘法(OPLS/O2PLS)模型。經(jīng)驗證,該模型可靠,且模型的累積預(yù)測度較基于8792個變量的OPLS/O2PLS模型的累積預(yù)

6、測度有所提高。將901個變量進(jìn)行Logistic回歸建模及受試者工作特征曲線(ROC曲線)評估,新模型的預(yù)測能力以及診斷能力良好。其ROC曲線的曲線下面積、標(biāo)準(zhǔn)誤以及95％的置信區(qū)間等指標(biāo)均優(yōu)于MELD。
　　 結(jié)論：
　　 UPLC/MS作為代謝組學(xué)研究的常用檢測工具,用于尿液代謝組學(xué)研究具有高靈敏度和高特異性的特點。通過對乙肝肝衰竭組與正常對照組、ALSS治療前后以及不同預(yù)后的乙肝肝衰竭患者的尿液代謝譜的研究,發(fā)現(xiàn)基