人工肝治療慢加急(亞急)性乙肝肝衰竭的代謝組學(xué)研究.pdf

1、據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道,全球約20億人曾感染過(guò)HBV,其中3.5億人為慢性HBV感染者,每年約有100萬(wàn)人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和HCC。我國(guó)現(xiàn)有的慢性HBV感染者約9300萬(wàn)人,其中慢性乙型肝炎患者約2000萬(wàn)例。每年各種原因引起的終末期肝病800萬(wàn),死于肝病約50萬(wàn)。肝衰竭過(guò)程中發(fā)生很多內(nèi)源性物質(zhì)的積聚,比如膽紅素,氨,谷氨酰胺,乳酸,芳香族氨基酸,自由脂肪酸,苯酚,硫醇,苯二氮類以及促炎癥細(xì)胞因子。由于肝細(xì)胞大量急劇壞死,

2、肝衰竭患者病情危重,預(yù)后極差,內(nèi)科綜合治療患者病死率高達(dá)60～80％。急性肝衰竭的標(biāo)準(zhǔn)治療方法是原位肝移植,但由于供肝的短缺,很多肝衰竭病人在肝移植等待過(guò)程中死亡。人工肝支持系統(tǒng)(ALSS)是一套獨(dú)特有效的肝衰竭救治方案,極大地降低了肝衰竭患者病死率。急性、亞急性重型肝炎治愈好轉(zhuǎn)率由20.0％提高至80.0％,慢性重型肝炎由5.6％提高至48.8％。然而,臨床上具有相同生化指標(biāo)的病人卻有著不確定的預(yù)后,有些病人會(huì)治愈,有些病人則死亡。至

3、今仍沒有令人滿意的預(yù)后預(yù)測(cè)指標(biāo)。同時(shí),人工肝治療前后血漿代謝物水平發(fā)生顯著變化,至今還沒有在代謝組學(xué)水平研究人工肝治療效果的研究。
　　 本研究使用超高效液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)研究不同預(yù)后以及人工肝治療前后的慢加急(亞急)性乙肝肝衰竭患者的血漿代謝物差異。本研究選擇進(jìn)行了2次以上非生物型人工肝支持系統(tǒng)治療的慢加急(亞急)性乙肝肝衰竭患者50例(共進(jìn)行296例次人工肝支持治療),取患者血漿進(jìn)行超高效液相色譜聯(lián)合四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜的代謝

4、組學(xué)分析,數(shù)據(jù)經(jīng)Masslynx和Simca-P進(jìn)行歸一化,主成份分析(PCA)和正交最小二乘分析(OPLS)計(jì)算。
　　 使用Simca-P+12.0構(gòu)建了可以預(yù)測(cè)慢加急(亞急)性乙肝肝衰竭預(yù)后的代謝組學(xué)正交最小二乘模型(OPLS),該模型基于第一次人工肝治療前所采集的血漿樣本,解釋能力和預(yù)測(cè)能力優(yōu)秀(R2Y=0.943,Q2=0.913),ROC曲線下面積0.968(95％CI[0.951,0.985]),明顯優(yōu)于MELD(

5、the Model for End-stage LiverDiseases)評(píng)分的預(yù)測(cè)能力(0.737,95％CI[0.578,0.896])。鑒定出了三類十三種生物標(biāo)記物:溶血卵磷脂(lysophosphatidylcholine,LPC),初級(jí)脂肪酰胺(primary fattyacid amides,FAA)和結(jié)合型膽汁酸(conjiugated bile acids)。LPC和結(jié)合型膽汁酸是病人好轉(zhuǎn)的保護(hù)因素,而脂肪酰胺是病人好

6、轉(zhuǎn)的危險(xiǎn)因素。本模型的預(yù)測(cè)截?cái)嘀凳?.196,在這一點(diǎn)模型具有對(duì)好轉(zhuǎn)組和未好轉(zhuǎn)組的最佳區(qū)分,模型的敏感度95％,特異度87％。這個(gè)基于代謝輪廓分析的代謝組學(xué)模型不僅提供了對(duì)慢加急(亞急)性乙肝肝衰竭預(yù)后的優(yōu)良區(qū)分和預(yù)測(cè),而且可提供潛在肝移植需求的早期和精確預(yù)警。
　　 分析了非生物型人工肝支持系統(tǒng)治療慢加急(亞急)性乙肝肝衰竭前后血漿代謝組學(xué)的變化。PCA圖分析發(fā)現(xiàn)治療后代謝軌跡基本一致,OPLS模型可以很好的區(qū)分治療前后,模型

7、經(jīng)CV-ANOVA檢驗(yàn)極顯著(P=8.7x10-10)。根據(jù)VIP得分由高到低,鑒定出8種生物標(biāo)記物。PCA圖中,預(yù)后不同的病人分別集中在X軸兩側(cè)分組明顯,而人工肝治療前后的變化主要表現(xiàn)在縱軸上(第二主成份),由此推斷除了人工肝治療,病人本身的狀態(tài)也是預(yù)后的決定性因素。在治療前后差異最大的物質(zhì)中,溶血卵磷脂在治療后升高,甘氨鵝脫氧膽酸在治療后降低。這種治療效果在連續(xù)3次人工肝治療中有相同的趨勢(shì)。本研究闡明了非生物型人工肝支持系統(tǒng)在小分子