TGF-β1對(duì)肝癌細(xì)胞整合蛋白表達(dá)及其介導(dǎo)的倍號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控.pdf

1、上海醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文TGFβ1對(duì)肝癌細(xì)胞整合蛋白表達(dá)及其介導(dǎo)的倍號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控姓名：蔡婷申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：查錫良20000501碩士學(xué)位論史4其增加程度不如0L5亞放明顯，可能是由于妻孵胞表面6l妲基的表迭薰大大高于嬈5亞基的結(jié)暴。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示TGFB1可以明顯增加細(xì)跑表面整合簧當(dāng)程5委基穗表送，使彝l亞基憋表迭略有增加。這耱效應(yīng)亦呈劑贊依賴性。應(yīng)用RTPCR法測(cè)定整合蛋白0c5131的mRNA水平

2、，結(jié)果溉示10ng／mlTGF131處理細(xì)胞4—8小時(shí)后整合蛋白Ⅸ5藏基的mRNA水平為對(duì)照的212倍，12小時(shí)達(dá)到3。25倍，24小時(shí)后掰落，但識(shí)為未楚理幫的2，2倍。與＆5的表達(dá)穰斃，瑟l鰓mRNA則表現(xiàn)為在2小時(shí)為對(duì)照的115倍，而4、8、12、24小時(shí)無(wú)明顯變化，24小時(shí)為對(duì)照的122倍。提示TGFB1可以促進(jìn)a5亞基在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)，并可熊調(diào)節(jié)8l雙基在轉(zhuǎn)錄詹水乎的表達(dá)。此外，TGFBl還可以明顯促進(jìn)細(xì)胞與主要胞外基饜蛋白一纖

3、維連結(jié)蛋奄(Fn)的粘附，為對(duì)照細(xì)胞的l，87倍(P001)，與a5131整合甍由表達(dá)的增加相對(duì)應(yīng)；同時(shí)，TGF，B1處理組細(xì)胞與層粘連蛋白(Ln)鼴耱瓣也增加，為對(duì)照緞恕鶴168倍≤P001)。鰓跑粘聚與藏癩的遷移、轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，因此我們應(yīng)用劃痕法和瓊脂滴法測(cè)定了細(xì)胞的遷移能力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)TGFB1處理24、48小時(shí)后可以明顯增加肝癌細(xì)胞的適移率(P005)。整合蠶白與配舔結(jié)合蒡聚集成簇后，l亟基妁趨爨段可促使粘著斑激酶(Focalad

4、hesionkinase，F(xiàn)AK)發(fā)生自身酪氨酸磷酸化而被激活，成為整合蛋白介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的重要事件。Gates和Cary蜒醭黨發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)AK蟪磷酸化水乎與細(xì)胞的遷移能力密切趣關(guān)。我們的研究發(fā)現(xiàn)TGF拜l處理人肝癌細(xì)胞后，可以增加FAK的酪氨酸磷酸化，用l、5、10、20ng／mlTGF—Bl處聯(lián)7721細(xì)胞48小時(shí)后，F(xiàn)AK的酪氨酸磷酸化水乎為對(duì)照的1。12，119，151，198倍。同時(shí)以FAK為瘋秘捷其發(fā)生去磷酸詫懿抑癌基霞P

5、TEN磚表達(dá)囊《有洚甄秘趨勢(shì)，分別為對(duì)照組的67％、46％、36％、48％。此外，時(shí)間效廈曲線顯示TGF131處理12小時(shí)即可改變FAK的磷酸化和PTEN的表達(dá)。因而推測(cè)TGF鼬除了通過(guò)增加伐5臥整合蛋白妁表達(dá)r增強(qiáng)由其所介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，胰而增加整合蛋白下游酶信號(hào)分子FAK秘磷酸化以外，還可能通過(guò)下降PTEN的表達(dá)，影響FAK的磷酸化。Tamura、Besson等的研究指出，PTEN在數(shù)種腫瘤中的表達(dá)下降，PTEN表迭媳增燕可以柳裁脖瘸