山西定襄縣婦女宮頸人乳頭瘤病毒型別分布研究和HPV61、83和84型標(biāo)準(zhǔn)品制備.pdf

1、目的:宮頸癌是全球女性最主要的癌癥之一。分子流行病學(xué)證據(jù)明確顯示人乳頭瘤病毒(HPV)是宮頸癌及其癌前病變發(fā)生的必要因素。本研究對(duì)山西省定襄縣女性宮頸HPV感染情況進(jìn)行了調(diào)查,了解我國(guó)山西農(nóng)村地區(qū)HPV的型別分布。同時(shí)制備HPV61、83和84型包含MY片段的標(biāo)準(zhǔn)品,作為篩查乳頭瘤病毒科α屬第3種中HPV61、83和84型的陽(yáng)性對(duì)照。
　　 資料和方法:2008年11月至2009年2月,采取普查的方法在山西省忻州市定襄縣選取兩個(gè)

2、行政村15-76歲的智力健全并知情同意的女性進(jìn)行HPV感染和宮頸癌的調(diào)查。應(yīng)用以MY09/11和GP5+/6+為引物的PCR方法檢查817例標(biāo)本中HPV的感染情況,然后通過(guò)序列分析和點(diǎn)雜交方法明確HPV的型別。同時(shí)也對(duì)該調(diào)查中發(fā)現(xiàn)的乳頭瘤病毒科α屬第3種中的HPV61、83和84型分離株,使用HPV通用引物MY09/11對(duì)上述分離株進(jìn)行PCR擴(kuò)增,并將擴(kuò)增產(chǎn)物連接至pMD18-T載體,所得質(zhì)粒進(jìn)行序列分析,應(yīng)用BioEdit生物學(xué)軟件進(jìn)

3、行了核苷酸水平和氨基酸水平的分析。
　　 結(jié)果:山西省定襄縣15-76歲女性宮頸HPV的總感染率為15.1％,單一HPV型別感染的占87.0％,兩種及以上型別感染的占13.0％。35-44歲年齡段是該地區(qū)HPV感染的高峰年齡,HPV16、58、33和18型是該地區(qū)人群中的最常見(jiàn)的4種型別,同時(shí)在細(xì)胞學(xué)正常、LSIL、HSIL以及宮頸癌的人群中HPV的感染率逐漸增高。另外,HPV61和83型分離株分別與參考株序列U31793和AF

4、151983比對(duì),在核苷酸水平完全一致；HPV84型分離株與參考株序列AF293960比對(duì),在核苷酸水平發(fā)生4個(gè)點(diǎn)突變,分別為C6760T、T6931C、T6951C和C6987A,其中C6987A導(dǎo)致D441E氨基酸殘基的突變。分別將包含上述三個(gè)分離株MY片段的質(zhì)粒與HPV陰性的宮頸癌細(xì)胞系C33A全核酸混合制備標(biāo)準(zhǔn)品并以此作為模板,對(duì)MY09/11的擴(kuò)增進(jìn)行了評(píng)估,發(fā)現(xiàn):HPV61型標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)的靈敏度高于HPV83和84型。