GM6001對(duì)高氧誘導(dǎo)的小鼠視網(wǎng)膜PEDF的影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本課題通過(guò)高氧誘導(dǎo)的小鼠視網(wǎng)膜新生血管動(dòng)物模型玻璃體內(nèi)注入GM6001觀察對(duì)視網(wǎng)膜PEDF表達(dá)的影響。 方法：選取鼠齡為7天的SPF級(jí)C57BL/6J小鼠48只(96只眼),隨機(jī)分為4組：正常組、高氧組、GM6001干預(yù)組和磷酸鹽緩沖液對(duì)照組,每組12只。正常對(duì)照組鼠在正?？諝猸h(huán)境中飼養(yǎng),其余3組鼠置于氧箱中,建立高氧誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜新生血管動(dòng)物模型。在出生后第12天GM6001干預(yù)組幼鼠向玻璃體腔內(nèi)注射GM6001μl,而磷

2、酸鹽緩沖液對(duì)照組注射相同體積的磷酸鹽緩沖液,正常組和高氧組不做處理。各組小鼠均在出生后第17天處死。摘除左眼球制作石蠟標(biāo)本,分別用抗PEDF和抗CD31抗體作免疫組織化學(xué)標(biāo)記視網(wǎng)膜切片進(jìn)行組織病理學(xué)觀察：右眼剝離視網(wǎng)膜提取蛋白,采用ELISA法分析PEDF以及MMPS在視網(wǎng)膜中的含量。 結(jié)果：高氧照組與正常組相比,視網(wǎng)膜組織可見(jiàn)大量突破內(nèi)界膜的新生血管形成,炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯,說(shuō)明視網(wǎng)膜新生血管動(dòng)物模型誘導(dǎo)成功。GM6001治療組

3、和PBS對(duì)照組相比,突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的新生血管稀疏,管腔細(xì)小,生長(zhǎng)面積明顯縮??；免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,在正常視網(wǎng)膜組織,PEDF在視網(wǎng)膜各層均有較強(qiáng)表達(dá),呈棕黃色或棕色顆粒以神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層和神經(jīng)纖維層表達(dá)最為強(qiáng)烈,在外核層也有表達(dá)；高氧組和PBS對(duì)照組PEDF的在視網(wǎng)膜各層的表達(dá)均減弱,只是在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層和神經(jīng)纖維層有較明顯的表達(dá)；GM6001治療組視網(wǎng)膜各層均有較強(qiáng)表達(dá),與正常組表達(dá)相近。ELISA結(jié)果顯示MMP-2,MMP-9,P

4、EDF的含量正常組、GM6001組、PBS對(duì)照組及高氧組之間在統(tǒng)計(jì)學(xué)上均有差異；GM6001組和正常組之間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,高氧組和PBS對(duì)照組沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在第17天時(shí)PEDF視網(wǎng)膜中的的含量GM6001組為PBS對(duì)照組的1.7倍,MMP-2視網(wǎng)膜中的含量GM6001組為PBS對(duì)照組的0.47倍,MMP-9視網(wǎng)膜中的的含量GM6001組為PBS對(duì)照組的0.36倍。 結(jié)論：玻璃體內(nèi)注入一定劑量的GM6001通過(guò)抑制基質(zhì)金屬蛋白酶