炎癥對大鼠氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變的影響.pdf

1、視網(wǎng)膜血管的正常發(fā)育對獲得正常視覺至關(guān)重要。當(dāng)未成熟的視網(wǎng)膜暴露于某些危險因素時，視網(wǎng)膜血管化過程可受阻，甚至?xí)^發(fā)形成視網(wǎng)膜新生血管（RNV），發(fā)生早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變（ROP）。ROP可對患兒視功能造成嚴(yán)重?fù)p害，甚至致盲，現(xiàn)已成為世界范圍內(nèi)兒童盲的首要原因。
　　ROP的病因復(fù)雜，發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。除早產(chǎn)、低出生體重和不規(guī)范用氧等公認(rèn)的主要危險因素外，近年來，大量臨床觀察資料顯示，發(fā)生于妊娠期母體或新生兒自身的感染/炎癥，也與

2、ROP的發(fā)生及病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)，且不同時期發(fā)生的感染/炎癥可能參與ROP病理過程的不同階段。相關(guān)的基礎(chǔ)研究結(jié)果也提示，全身或局部的炎癥反應(yīng)可影響視網(wǎng)膜血管發(fā)育，并參與調(diào)控RNV形成。進(jìn)一步探討炎癥因素在ROP發(fā)生發(fā)展中的作用，將有助于ROP發(fā)病機(jī)制的闡明，并為其防治策略的拓展提供新的線索及理論依據(jù)。
　　目的:
　　觀察細(xì)菌脂多糖（LPS）誘導(dǎo)全身炎癥對大鼠氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變（OIR）的影響，以探討新生兒自身炎癥反應(yīng)在RO

3、P發(fā)生發(fā)展中的可能作用。
　　方法:
　　1、大鼠OIR模型的建立與炎癥誘導(dǎo)：將新生SD大鼠隨機(jī)分為正常對照組（N組）、氧誘導(dǎo)對照組（OIR組）和實驗組（OIR+LPS組）。將OIR組和OIR+LPS組新生大鼠于出生后12h內(nèi)置于密閉氧箱中，控制氧濃度為80％（高氧）和21%（常氧），每24h交替一次，直至出生后14天（P14），隨后在常氧條件下繼續(xù)飼養(yǎng)幼鼠，以建立OIR模型；P7給予OIR+LPS組幼鼠腹腔注射LPS（50

4、0μg·kg-1）以誘導(dǎo)全身炎癥反應(yīng)。
　　2、炎癥對OIR大鼠全身狀況的影響：在P7（LPS注射前）、P8、P11、P14等時間點對幼鼠的體重進(jìn)行測量；于LPS注射前0h、注射后6h、12h、24h、48h等不同時間點行肺組織大體形態(tài)學(xué)觀察。
　　3、炎癥對OIR病變過程的影響：P14、P18、P22時分別制作全視網(wǎng)膜鋪片，行GS-isolectin B4血管染色，觀察幼鼠視網(wǎng)膜血管化情況及RNV分布情況，并對視網(wǎng)膜無血管

5、區(qū)面積和RNV嚴(yán)重程度進(jìn)行定量分析。同時，P18時通過視網(wǎng)膜組織病理切片HE染色的方法，對突破內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核進(jìn)行計數(shù)及統(tǒng)計學(xué)分析。
　　4、炎癥對OIR病程中RNV形成階段視網(wǎng)膜組織VEGF蛋白表達(dá)的影響：P18時，采用Western blot的方法檢測視網(wǎng)膜組織VEGF蛋白的表達(dá)變化。
　　5、炎癥對OIR大鼠視網(wǎng)膜功能的影響：P18行視網(wǎng)膜電圖（ERG）檢測，并對比分析暗適應(yīng)3.0反應(yīng)中a波、b波及暗適應(yīng)3.0

6、Ops反應(yīng)中O2子波的潛伏期和幅值。
　　結(jié)果:
　　1、炎癥對OIR大鼠全身狀況的影響：在各檢測時間點，OIR+LPS組及OIR組幼鼠的體重均低于N組（P＜0.05），至P14時三組幼鼠的體重分別為（30.67±2.63） g、(33.12±2.11)g和(36.21±2.34)g，且在LPS注射后的所有時間點OIR+LPS組幼鼠的體重比OIR組更低（P＜0.05）。肺組織大體形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，LPS注射后6h、12h、24

7、h，OIR+LPS組幼鼠肺組織呈現(xiàn)明顯的炎性充血狀態(tài)。
　　2、炎癥對OIR病變過程的影響：N組幼鼠的視網(wǎng)膜于P14已基本完成血管化；觀察至P22無RNV出現(xiàn)。OIR組幼鼠在P14時存在視網(wǎng)膜無血管區(qū)，至P22視網(wǎng)膜血管化基本完成，P14、P18及P22時視網(wǎng)膜無血管區(qū)面積分別約占視網(wǎng)膜總面積的(19.86±2.78)%、(4.56±1.46)%和(1.01±0.90)%；P18視網(wǎng)膜血管區(qū)與無血管區(qū)交界處可見RNV出現(xiàn)，至P22

8、時RNV病變消退。LPS干預(yù)后，OIR病變過程中的視網(wǎng)膜血管化阻滯和RNV狀況均明顯加重，P14、P18和P22三個檢測時間點，視網(wǎng)膜無血管區(qū)面積分別占(27.32±3.58)%、(8.48±1.10)%和(3.82±1.39)%，與OIR組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。P18時，OIR+LPS組RNV面積為(1.10±0.14)%，大于OIR組[(0.72±0.13)%，P＜0.05]；RNV累及鐘點數(shù)為9.89±1.72，較

9、 OIR組明顯增多（3.83±0.75，P＜0.05）；突破內(nèi)界膜的內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)為9.89±1.72，多于 OIR組（6.06±1.53，P＜0.05）。此外，OIR+LPS組因 RNV引起的視網(wǎng)膜出血更明顯，至P22時RNV仍未完全消退。
　　3、炎癥對RNV形成階段視網(wǎng)膜組織VEGF蛋白表達(dá)的影響：Western blot檢測結(jié)果顯示，P18時，OIR組和OIR+LPS組視網(wǎng)膜組織VEGF蛋白的相對表達(dá)量均高于N組，其中OIR

10、+LPS組的表達(dá)量最高，三組間兩兩差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　4、炎癥對OIR幼鼠視網(wǎng)膜功能的影響：P18時，與N組相比，OIR組和OIR+LPS組幼鼠 ERG各檢測波的波形明顯低平，甚至呈現(xiàn)熄滅樣，全視網(wǎng)膜功能顯著下降。LPS干預(yù)后視網(wǎng)膜功能更差，主要表現(xiàn)為在暗適應(yīng)3.0反應(yīng)中，OIR+LPS組a波和b波的潛伏期[(20.67±3.78)ms和(107.83±18.31)ms]，與N組[(16.00±1.26)ms和