右美托咪定對小鼠缺血-再灌注損傷肺CHOP凋亡通路的干預.pdf

1、目的:
　　探索右美托咪定對小鼠缺血/再灌注損傷肺C/EBP同源蛋白(C/EBPhomologous protein，CHOP)凋亡通路的干預作用。
　　方法:
　　采用40只SPF級雄性8-10周齡C57BL/6J小鼠，體重18～22g，復制在體原位左肺I/R損傷模型。實驗隨機分4組為(n=10):假手術(shù)組（sham組），缺血/再灌注損傷模型組（I/R組），I/R+生理鹽水（NS組），I/R+右美托咪定預處理組（DE

2、X組）。I/R組小鼠經(jīng)氯胺酮（100 mg/kg）+賽拉嗪(10 mg/kg)腹腔注射復合麻醉后，仰臥位固定小鼠，進行氣管切開插管，連接小鼠呼吸機，進行機械通氣。經(jīng)左2～3肋間行胸廓切開術(shù)進入左胸，開胸后暴露并游離左肺門，夾閉左肺門缺血30 min，松開動脈夾再灌注180 min。sham組僅開胸游離肺門而不夾閉，肺門游離后機械通氣210 min;DEX組在左肺缺血前30 min腹腔注射DEX25μg/kg，NS組則給予與DEX同體積的

3、生理鹽水。實驗灌注期結(jié)束，取出左肺組織，按需保存。測定肺組織干濕比值(lung wet weight to dry weight ratio，W/D)、總肺含水量(total lung water content，TLW)，評估肺組織損傷指數(shù)(the index ofquantitative assessment of histological lung， IQA)。TUNEL方法檢測肺組織細胞的凋亡指數(shù)(apoptosis index

4、， AI)，Western blot和逆轉(zhuǎn)錄PCR(reverse translatePCR，RT-PCR)分別檢測各組肺組織內(nèi)CHOP(C/EBP homologous protein，CHOP)、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose regulated protein of molecular weight78 kDa，grp78)蛋白和mRNA變化趨勢。
　　結(jié)果:
　　1、肺組織濕干重比(W/D)、總肺水含量(TLW)

5、:與sham組比，其余各組肺W/D、TLW指標明顯上升（P＜0.05或P＜0.01）;I/R組和NS組W/D和TLW指標無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）;DEX預處理組W/D及TLW較I/R組和NS組明顯下降(P＜0.01)。
　　2、肺組織形態(tài)學觀察: sham組對比，其余各組肺組織結(jié)構(gòu)破壞跡象明顯，肺組織損傷指數(shù)(IQA)上升（P＜0.01）;DEX組較I/R組和NS組明顯改善，IQA明顯下降(P＜0.01)。
　　3、肺組

6、織超微結(jié)構(gòu)觀察:sham組肺組織微絨毛、板層小體及線粒體等結(jié)構(gòu)相對完整，I/R組和NS組內(nèi)微絨毛明顯脫落，板層小體空泡化顯著，線粒體水腫;DEX組板層小體形態(tài)較完整，空泡化明顯減輕，線粒體形態(tài)相對完好。
　　4、AI: sham組凋亡較弱，其余各組凋亡顯著(P＜0.01)，DEX組凋亡較I/R組和NS組顯著減輕（P＜0.01）。
　　5、蛋白和mRNA檢測:sham組CHOP和grp78其蛋白和mRNA均表達較弱;I/R組與