托吡酯在血清和腦脊液中藥代動(dòng)力學(xué)的比較性研究.pdf

1、目的:建立測(cè)定血清和腦脊液（cerebrospinal liquid，CSF）中托吡酯(topiramate，TPM)藥物濃度新的檢測(cè)方法即氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)，為進(jìn)行TPM的藥代動(dòng)力學(xué)研究和臨床藥物濃度監(jiān)測(cè)奠定基礎(chǔ)。方法采用乙酸乙酯提取樣品，鹽酸阿米替林作為內(nèi)標(biāo)，氦氣為載體，流速為1.0ml/min；柱前壓為91.5kPa。升溫程序：柱溫150℃恒溫2min，以20℃·min-1的速率升溫至280℃。以電子轟擊離子源（EI）

2、,選擇性離子監(jiān)測(cè)（SIM）模式分別選擇M/Z為324和202的碎片離子對(duì)TPM和阿米替林進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果在血清及CSF中無干擾TPM測(cè)定的內(nèi)源性物質(zhì)，在血清中TPM標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為0.180～35.933μg·ml-1,線性關(guān)系良好（r=0.9994），實(shí)測(cè)最低定量濃度為0.180μg·ml-1，血清樣品檢測(cè)的日內(nèi)RSD≤8.53％，日間RSD ≤14.19％，萃取回收率平均值為64.09％，相對(duì)萃取回收率為80.26％；CSF中TPM標(biāo)準(zhǔn)

3、曲線范圍為0.0359～35.933μg·ml-1,線性關(guān)系良好（r=0.9996），最低定量限為0.0359μg·ml-1，CSF 樣品檢測(cè)的日內(nèi)RSD≤7.70％，日間RSD≤10.57％，萃取回收率平均值為79.8％，相對(duì)萃取回收率為86.15％。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)成功地建立了TPM在血清及CSF中藥物濃度檢測(cè)的GC-MS法，各項(xiàng)指標(biāo)均符合生物樣品分析測(cè)定要求，專屬性強(qiáng)，靈敏度高，重復(fù)性好。該方法適用于臨床藥物動(dòng)力學(xué)研究和常規(guī)的TPM臨床

4、藥物濃度監(jiān)測(cè)。目的（1）觀察不同劑量TPM在Beagle犬血清中藥代動(dòng)力學(xué)(pharmacokinetics，PK)特征；（2）觀察不同劑量TPM在Beagle犬腦內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)特征；（3）比較不同劑量TPM同期在血和腦內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)變化的差異及其相關(guān)性，以探索血腦屏障對(duì)TPM在腦內(nèi)代謝的影響；（4）探索不同劑量TPM在血清和腦內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)的不同變化。方法（1）將6月～12月齡、體重9.6 kg～14.2kg Beagle犬12只隨機(jī)分為3

5、組，每組4只，雌雄各半，分別給予TPM10mg·kg-1、20mg?kg-1、40mg?kg-1灌胃頓服，于用藥前0點(diǎn)、用藥后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、4、6、10、14、20、26、36h同時(shí)抽取血清及CSF標(biāo)本；（2）用GC-MS 檢測(cè)所采集的血清和CSF標(biāo)本中TPM 藥物濃度；（3）用藥物代謝動(dòng)力學(xué)軟件DAS2.0程序處理藥-時(shí)數(shù)據(jù)，擬合房室模型，計(jì)算藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)，峰濃度（Cmax）、達(dá)峰時(shí)間（Tmax）取實(shí)測(cè)

6、值，運(yùn)用SPSS軟件包中Wilcoxon符號(hào)秩和檢驗(yàn)、成組設(shè)計(jì)多樣本比較的秩和檢驗(yàn)和直線相關(guān)與回歸檢驗(yàn)，對(duì)各組TPM在血清和CSF中的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01有顯著性差異。結(jié)果（1）經(jīng)過時(shí)-藥濃度和藥-時(shí)曲線以及據(jù)此所計(jì)算出的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)比較，低、中、高劑量頓服給藥后在血清中除Cmax隨劑量增加而呈正相關(guān)增高外，其余主要藥-動(dòng)學(xué)參數(shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，Tmax 均為1.5h，提示在各劑量頓服

7、給藥后在Beagle犬血清中TPM 均呈線性藥代動(dòng)力學(xué)特征；（2）在血清中TPM藥物濃度清除至Cmax 的1/10以下在低、中、高劑量組均為 14h左右，而在CSF中TPM 藥物濃度清除至Cmax 的1/10 以下為14h～20h；（3）低、中、高劑量頓服后在CSF 中Cmax所占血清中的比值分別是40.7％、67.9％、60.1％，提示Cmax 在低、中劑量隨著給藥劑量增加，在CSF 中Cmax比值增加；隨著TPM 給藥劑量的繼續(xù)增加

8、，在高劑量組CSF 中的Cmax 的比值不再增加，反而較中劑量組明顯下降；（4）低、中劑量頓服給藥后在CSF中TPM 藥-動(dòng)學(xué)特征亦呈線性，但在高劑量組CSF 中的藥-動(dòng)學(xué)特征則呈非線性,與在血清中的藥-動(dòng)學(xué)特征呈非一致性；（5）TPM 在CSF 中的吸收、代謝、清除、Tmax明顯長(zhǎng)于在血清中的同一參數(shù)，提示TPM 在腦內(nèi)有獨(dú)立的代謝機(jī)制。結(jié)論（1）TPM 在血清中的藥-動(dòng)學(xué)呈線性關(guān)系特征，在低、中、高劑量頓服給藥后各組主要藥-動(dòng)學(xué)參數(shù)

9、無變化；（2）低、中劑量頓服給藥時(shí)在CSF 中的藥-動(dòng)學(xué)特征亦呈線性關(guān)系，但在本試驗(yàn)中高劑量頓服給藥時(shí)（相當(dāng)于成人400mg·d-1）在CSF中呈非線性藥-動(dòng)學(xué)特征，隨著TPM的給藥劑量增加，血清中Cmax呈線性增高，在CSF 中Cmax 不再顯著增高，在CSF 中Cmax所占血清中Cmax的比例較中劑量反而明顯下降，這一結(jié)果在國(guó)內(nèi)外尚屬首次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)；（3）在國(guó)內(nèi)外首次在低、中、高劑量組對(duì)比研究TPM在腦內(nèi)的藥-動(dòng)學(xué)特征，而且首次發(fā)現(xiàn)T