TGF-β1誘導(dǎo)人胎肺成纖維細(xì)胞分泌血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子以及布地奈德的調(diào)控作用.pdf

1、目的:氣道重構(gòu)及肺纖維化形成是引起呼吸系統(tǒng)疾病致殘率和死亡率上升的主要原因，亦是疾病防治的重點(diǎn)及難點(diǎn)。許多研究證實(shí)，炎癥損傷及組織修復(fù)失衡是導(dǎo)致支氣管肺部纖維化的主要成因，其中可能涉及血管新生及相應(yīng)生長(zhǎng)因子。本實(shí)驗(yàn)通過應(yīng)用轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(transforming growth factor-β1，TGF-β1)刺激人胎肺成纖維細(xì)胞(humanfetal lung fibroblast-1，HFL-1)，檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascula

2、rendothelial growth factor，VEGF)在其中的表達(dá)，以及觀察布地奈德(Budesonide，Bud)對(duì)HFL-1分泌VEGF的干預(yù)作用。 方法:本實(shí)驗(yàn)采用細(xì)胞培養(yǎng)法，分三個(gè)部分： 第一部分探討TGF-β1誘導(dǎo)HFL-1分泌VEGF的時(shí)間依賴效應(yīng)，實(shí)驗(yàn)組加入0.25ng/ml TGF-β1刺激，分別在12、24、48、72小時(shí)收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液，經(jīng)酶聯(lián)免疫分析法(enzyme immunoassa

3、y，EIA)檢測(cè)VEGF含量，同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)： 第二部分探討 TGF-β1誘導(dǎo)HFL-1分泌VEGF的濃度依賴效應(yīng)，實(shí)驗(yàn)組加入不同濃度(0、0.025、0.05、0.25、0.5、2.5、5ng/ml)TGF-β1刺激，孵育72小時(shí)后收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液，經(jīng)EIA檢測(cè)VEGF含量；第三部分探討布地奈德對(duì)HFL-1分泌內(nèi)源性和外源性VEGF的影響，實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)分為對(duì)照組、不同濃度(10<'-11>M、10<'-9>M、10<'-7>

4、M)布地奈德干預(yù)組、0.5ng/ml TGF-β1+不同濃度(10<'-11>M、10<'-9>M、10<'-7>M)布地奈德干預(yù)組，孵育72小時(shí)后檢測(cè)上清液VEGF含量。結(jié)果在第一部分實(shí)驗(yàn)中，隨著細(xì)胞孵育時(shí)間延長(zhǎng)，TGF-β1刺激組成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)加快，細(xì)胞生長(zhǎng)密度增加；VEGF分泌水平也增加，在72小時(shí)點(diǎn)達(dá)到分泌高峰，并且各時(shí)間點(diǎn)VEGF相對(duì)含量均高于對(duì)照組，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。在第二部分實(shí)驗(yàn)中，低濃度TGF-β1(

5、≤0.5ng/ml)上調(diào)VEGF的表達(dá)量與對(duì)照組比較差異無顯著性(P>0.05)；隨著’TGF-B1刺激濃度加大，VGEF含量也逐漸增加，當(dāng)TGF-β1濃度為5ng/ml時(shí)，VEGF相對(duì)含量與空白對(duì)照組相比增加了近七倍，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 第三部分實(shí)驗(yàn)中，低濃度(10<'-11>M)Bud刺激內(nèi)源性VEGF分泌輕微增加，但與空白對(duì)照組比較無明顯差異(P>0.05)；而高濃度(10<'-7>M)Bud不僅能

6、明顯阻斷內(nèi)源性VEGF’的表達(dá)，與空白對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，還可明顯下調(diào)TGF-β1誘導(dǎo)的VEGF分泌增加的效應(yīng)，與同時(shí)相相同濃度單獨(dú)TGF-β1刺激組比較，VEGF含量下降明顯，二者比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 結(jié)論:人胎肺成纖維細(xì)胞自身可分泌內(nèi)源性VEGF，TGF-β1能夠誘導(dǎo)HFL-1增殖及VEGF分泌增加，并具有時(shí)間和濃度依賴效應(yīng)。提示成纖維細(xì)胞是支氣管肺部纖維化病中主要的功能細(xì)胞，TGF-