布地奈德協同TGF-β誘導人支氣管上皮細胞和胎肺成纖維細胞中纖維粘連蛋白表達.pdf

1、目的:探討布地奈德對轉化生長因子(TGF-β)誘導人胎肺成纖維細胞(HFL-1)、人支氣管上皮細胞(HBEC)中細胞外基質成分纖維粘連蛋白(FN)的表達的影響。 方法:經原代培養(yǎng)傳代獲得的人支氣管上皮細胞和胎肺成纖維細胞培養(yǎng)，在5％CO2或95％空氣，37℃的孵箱中，在100mm的組織培養(yǎng)皿中，經酶解消化后以1×10<'5>的細胞接種于12孔板，細胞融合后，用無血清、無生長因子的培養(yǎng)基沖洗2-3遍，饑餓24小時。培養(yǎng)人胎肺成纖維

2、細胞在實驗前新鮮無血清培養(yǎng)液中加入及不同濃度的布地奈德同時加入TGF-β2、TGF-β3后共同孵育48小時。培養(yǎng)的人支氣管上皮細胞在實驗前，新鮮的無生長因子培養(yǎng)基中加入TGF-β的亞型TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、布地奈德或同時加入布地奈德與TGF-β共同孵育24小時。到規(guī)定的時間，回收上清液，儲存在-80℃，計數各孔細胞，ELISA法檢測上清夜中纖維粘連蛋白。 結果: ①人胎肺成纖維細胞與不同濃度的布地奈德

3、孵育48小時，隨劑量的增加，纖維粘連蛋白的表達增加，是基礎分泌量的5-6倍，呈劑量依賴性。 ②TGF-β2、TGF-β3誘導人胎肺成纖維細胞釋放纖維粘連蛋白，在不同濃度的布地奈德分別和TGF-β2、TGF-β3與共同孵育48小時后，隨布地奈德劑量的增加TGF-β2、TGF-β3能誘導釋放的纖維粘連蛋白進一步顯著增加。與單用TGF-β組相比p<0.05。 ③布地奈德、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3與人支氣管上皮細

4、胞共同孵育24小時后，布地奈德和TGF-βs均能顯著增加纖維粘連蛋白的釋放， ④布地奈德與FGF-β聯用后，纖維粘連蛋白的釋放進一步增加(p<0.05)。 結論: ①布地奈德能增加人胎肺成纖維細胞纖維粘連蛋白的分泌，并呈劑量依賴性。布地奈德協同TGF-β2、TGF-β3誘導人胎肺成纖維細胞中纖維粘連蛋白的分泌并呈劑量依賴性。 ②TGF-βs、布地奈德均促進人支氣管上皮細胞中纖維粘連蛋白的合成，同時布地奈德