中藥誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞凋亡及防治腹膜粘連研究.pdf

1、目的：腹膜粘連多由創(chuàng)傷及炎癥引發(fā)，經(jīng)過一系列復(fù)雜過程，最終形成腹膜纖維性粘連導(dǎo)致術(shù)后嚴(yán)重并發(fā)癥。通過對(duì)已形成的腹膜粘連組織進(jìn)行多種病理組織染色后的病理形態(tài)觀察，以明確腹膜纖維性粘連組織的構(gòu)成及結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，旨在尋求防治腹膜粘連的作用位點(diǎn)；通過對(duì)腹膜粘連的動(dòng)物模型中藥丹皮持續(xù)給藥，觀察其作用后粘連組織病理形態(tài)的改變，以探討其對(duì)腹膜粘連治療中的防治意義；從而進(jìn)一步研究中藥丹皮對(duì)腹膜粘連成纖維細(xì)胞增殖及凋亡的影響，以探討中藥丹皮對(duì)腹膜粘連的作用機(jī)

2、理，為臨床防治腹膜粘連提供細(xì)胞學(xué)理論依據(jù)。
　　 方法：收集2009年12月至2010年11月2例天津兒童醫(yī)院確診腹膜粘連性腸梗阻住院病人手術(shù)中取的粘連組織標(biāo)本，進(jìn)行HE染色、V-G染色及Masson三色染色三種病理組織染色，光鏡下觀察腹膜粘連組織的病理形態(tài)特點(diǎn)，分辨其間的成纖維細(xì)胞及膠原形態(tài)及結(jié)構(gòu)；此后取健康Wistar大鼠60只，隨機(jī)分為3組，每組20只。進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)：A組：創(chuàng)傷+感染粘連組，鉗夾腸壁后并于腹腔內(nèi)注入大腸桿菌

3、O11b4造模；B組：創(chuàng)傷+感染+中藥組，在A組的基礎(chǔ)上，術(shù)后12h丹皮4g灌胃。灌胃容量為4ml，每日1次；C組：正常組，開腹后未作其他處理即關(guān)腹，作為空白對(duì)照組。均于術(shù)后14d處死大鼠，觀察腹膜粘連大體情況，并評(píng)定粘連分級(jí)，取粘連部位組織行HE染色。利用Ridit分析行粘連分級(jí)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；進(jìn)而對(duì)腹膜粘連成纖維細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，采用倒置相差顯微鏡、細(xì)胞計(jì)數(shù)、流式細(xì)胞儀及試劑盒等方法進(jìn)行觀察、分析，以研究丹皮對(duì)腹膜粘連成纖維細(xì)胞生

4、物學(xué)行為以及凋亡的影響。
　　 結(jié)果：腹膜粘連組織中主要細(xì)胞為間皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞，大量以膠原為主的間質(zhì)增生，其間可見少量炎癥細(xì)胞等，并有小血管長(zhǎng)入；間皮細(xì)胞位于粘連組織的外層，其內(nèi)大量膠原無序排列，其間夾雜大量梭形成纖維細(xì)胞及纖維細(xì)胞。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中大體粘連分級(jí)A組>B組>C組，HE染色發(fā)現(xiàn)給藥組粘連程度明顯輕于腹膜粘連模型組，其鏡下表現(xiàn)粘連組織中成纖維細(xì)胞及膠原增生程度減輕；中藥丹皮口服治療，可以明確降低腹膜粘連程度和減少粘連帶

5、的形成，其機(jī)制可能與調(diào)控成纖維細(xì)胞的增殖和凋亡平衡相關(guān)；而體外培養(yǎng)的腹膜粘連成纖維細(xì)胞，加入丹皮后在倒置相差顯微鏡、細(xì)胞計(jì)數(shù)、流式細(xì)胞儀以及Annexin V FITC/PI測(cè)定下，與對(duì)照組比較，細(xì)胞表現(xiàn)為生長(zhǎng)趨勢(shì)及增殖活性被明顯抑制，而對(duì)細(xì)胞凋亡有誘導(dǎo)作用。
　　 結(jié)論：成纖維細(xì)胞及其分泌的膠原等細(xì)胞外基質(zhì)是粘連組織的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)；丹皮對(duì)成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)趨勢(shì)及增殖活性有明顯抑制作用，誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞凋亡。提示中藥丹皮是成纖維細(xì)胞負(fù)性