含植物性雌激素中藥對(duì)去卵巢大鼠局灶性腦缺血損傷防治作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：在建立去卵巢大鼠模型的基礎(chǔ)上，通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，探討含植物性雌激素中藥對(duì)腦缺血損傷的防治作用。 方法：健康雌性Wistar大鼠72只，體重200-250g，隨機(jī)分為3組，即正常組、去卵巢組(簡(jiǎn)稱(chēng)去勢(shì)組)、去卵巢加中藥組(簡(jiǎn)稱(chēng)實(shí)驗(yàn)組)各24只。經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)3天后，將去勢(shì)組和實(shí)驗(yàn)組大鼠實(shí)施卵巢切除術(shù)，正常組大鼠實(shí)施偽手術(shù)，只切除等量脂肪。術(shù)后10天，隔日進(jìn)行陰道涂片，觀察脫落細(xì)胞，以了解去勢(shì)是否完全。在確認(rèn)去勢(shì)成功后，三組大鼠繼續(xù)

2、給予飼料喂養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組在給予飼料喂養(yǎng)的基礎(chǔ)上同時(shí)給予含有雌激素的中藥復(fù)方(黃芪30g、三七粉3g(沖)、銀杏葉6g、蒲黃15g(包煎))灌胃，1次/天。正常組和去勢(shì)組給予等量蒸餾水灌胃。自給藥開(kāi)始2周后，對(duì)所有大鼠進(jìn)行局灶性缺血模型的制作。所有動(dòng)物在手術(shù)前6小時(shí)禁食，以防高血糖對(duì)缺血性腦損害的影響，參照文獻(xiàn)，采用線栓法制備大腦中動(dòng)脈局灶性腦缺血模型，大鼠腹腔內(nèi)注射10％水合氯醛(350mg/kg體重)麻醉后，仰臥固定，頸部正中切口，分離并

3、暴露右側(cè)頸總及頸內(nèi)、頸外動(dòng)脈，并在頸內(nèi)外動(dòng)脈分叉處結(jié)扎頸外動(dòng)脈，右側(cè)頸總動(dòng)脈剪口，插入頭端燒成圓鈍形直徑為0.25mm的尼龍魚(yú)線，進(jìn)長(zhǎng)度約18～19mm，在大腦中動(dòng)脈起始端堵塞大腦中動(dòng)脈，然后將頸總動(dòng)脈連同尼龍魚(yú)線一起結(jié)扎，縫合皮膚，放回籠內(nèi)，單籠喂養(yǎng)。選擇蘇醒后左上肢屈曲、行走時(shí)向左側(cè)旋轉(zhuǎn)或左側(cè)肢體癱瘓的大鼠為栓堵成功者進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，否則視為栓堵失敗，棄之不用。手術(shù)過(guò)程中監(jiān)測(cè)大鼠直腸溫度，并用電熱毯保持在36.5～37.5℃。 于

4、造模成功24小時(shí)后，處死各組大鼠，取以海馬為中心約10×8×5m<'3>的大腦組織，10％的甲醛固定，乙醇逐級(jí)脫水，石蠟包埋，切片機(jī)切片，HE染色和尼氏染色，光鏡觀察并攝像。斷頭取血，3500r/min離心10min，提取上清待測(cè)，檢測(cè)各組大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白介素8(IL-8)、白介素6(IL-6)、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)含量。用放射免疫法檢測(cè)TNF-α、IL-8、IL-6含量。采用雙抗體夾心ABC-ELISA法

5、測(cè)定MMP-9含量。在429nm測(cè)MMP-9的OD值，MMP-9濃度與OD值成正比，用酶標(biāo)儀測(cè)得OD值間接反映其含量的變化。 結(jié)果： 1、含植物性雌激素中藥對(duì)去卵巢大鼠局灶性缺血病理組織學(xué)的影響 正常組：海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞排列較亂，細(xì)胞脫失較多，細(xì)胞水腫較明顯。海馬CA3區(qū)錐體細(xì)胞脫失，細(xì)胞核固縮較多，細(xì)胞水腫較明顯。 去勢(shì)組：大鼠海馬CA1區(qū)和CA3區(qū)錐體細(xì)胞排列稀疏、紊亂，細(xì)胞體積縮小，胞核固縮，胞

6、漿濃縮、深染，細(xì)胞水腫明顯。 實(shí)驗(yàn)組：海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞排列較整齊，細(xì)胞脫失少，有少數(shù)細(xì)胞核固縮為三角形或多角形，細(xì)胞水腫不明顯。海馬CA3區(qū)錐體細(xì)胞脫失，部分細(xì)胞核固縮，細(xì)胞水腫不明顯。 2、含植物性雌激素中藥對(duì)去卵巢大鼠局灶性腦缺血后血清中TNF-α、IL-8、IL-6含量的影響 2.1與正常組比較，去勢(shì)組大鼠血清中TNF-α含量增高(P<0.05)，與去勢(shì)組比較，實(shí)驗(yàn)組血清中TNF-α含量下降(P<0

7、.05)。 2.2與正常組比較，去勢(shì)組大鼠血清中IL-8含量增高(P<0.01)，與去勢(shì)組比較，實(shí)驗(yàn)組血清中IL-8含量降低(P<0.01)。 2.3與正常組比較，去勢(shì)組大鼠血清中IL-6含量增高(P<0.05)，與去勢(shì)組比較，實(shí)驗(yàn)組血清中IL-6含量降低(P<0.05)。 3、含植物性雌激素中藥對(duì)局灶性缺血大鼠血清中MMP-9含量的影響 與正常組比較，去勢(shì)組大鼠血清中MMP-9增加(P<0.05)，與去