人細(xì)小病毒B19X基因和11KD基因克隆與表達(dá)及其功能的初步研究.pdf

1、人細(xì)小病毒B19(human parvovirus B19)是目前發(fā)現(xiàn)的細(xì)小病毒科中僅有的兩種(另一種為博卡病毒)使人類致病的病毒之一,在全世界廣泛分布。許多研究結(jié)果表明,B19病毒可感染各個(gè)年齡段的人群,但臨床癥狀各不相同。本實(shí)驗(yàn)室研究發(fā)現(xiàn),武漢地區(qū)普通人群的感染率約為4.50％,而育齡期婦女則高達(dá)8.50％。B19病毒顯示出的對(duì)原紅細(xì)胞的趨向性,使其只能在來自于骨髓的紅細(xì)胞,嬰兒肝細(xì)胞或像UT7／EPO這樣的細(xì)胞中復(fù)制,然而,也有研

2、究表明,在腺病毒的幫助下,B19病毒也可以在非允許細(xì)胞如293細(xì)胞系中進(jìn)行復(fù)制并產(chǎn)生有感染性的子代病毒粒子。最近,Chun Wang等發(fā)現(xiàn),B19病毒可以在肝組織細(xì)胞中長期存在,在感染HCV病人的體內(nèi)經(jīng)常能檢測(cè)到B19病毒的存在。由于B19病毒對(duì)人致病的廣泛性和復(fù)雜性,目前國際上對(duì)該病毒的研究日趨活躍,尤其對(duì)非結(jié)構(gòu)蛋白NS1的功能和作用機(jī)理的報(bào)道較多,而對(duì)x蛋白質(zhì)和11kD非結(jié)構(gòu)蛋白的研究則很少。
　　 本研究分為兩個(gè)部分：第一

3、部分主要是將B19病毒的X基因克隆到pET-28a載體上,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)了目的蛋白,純化并制備了相應(yīng)的抗體。同時(shí),實(shí)驗(yàn)還將x基因片段插入帶有綠色熒光蛋白GFP報(bào)告基因的pEGFP—N1表達(dá)載體中,構(gòu)建pEGFP—N1-X融合表達(dá)載體,觀察X蛋白質(zhì)在宿主細(xì)胞中的定位,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示融合蛋白在宿主細(xì)胞的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均有分布。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一步研究該蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能奠定了一定的基礎(chǔ)；第二部分主要是通過定點(diǎn)突變構(gòu)建缺失11KD的感染性