賁門癌組織浸潤淋巴細(xì)胞CD4，CD8和γδT及腫瘤細(xì)胞P53的表達(dá)及意義.pdf

1、研究背景賁門腺癌(Gastriccardiaadenocarcinoma，GCA)是我國北方地區(qū)尤其是河南林州地區(qū)最常見的惡性腫瘤之一。GCA的顯著流行病學(xué)特征是其與食管癌(Esophagealsquamouscellcarcinoma，SCC)地域分布的一致性。河南林州市及其毗鄰的輝縣、安陽地區(qū)是我國，也是世界賁門癌發(fā)病率和死亡率最高的地區(qū)。GCA與胃遠(yuǎn)側(cè)部位腫瘤在流行病學(xué)、發(fā)病因素、病理學(xué)及臨床特征等方面均存在較明顯的不一致性。但其

2、發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制尚不十分清楚。臨床上，TMN分期相同的賁門癌患者預(yù)后并不一致，很顯然，患者免疫功能狀況可能是影響預(yù)后的重要因素之一。但是有關(guān)賁門癌機(jī)體免疫的作用及其作用機(jī)制尚不清楚。 近年研究提示腫瘤細(xì)胞表面存在腫瘤抗原，機(jī)體免疫系統(tǒng)能識別這種抗原并產(chǎn)生一系列免疫應(yīng)答，最終導(dǎo)致排斥腫瘤；另一方面，腫瘤本身對免疫功能有抑制作用，同時腫瘤細(xì)胞在受到宿主免疫系統(tǒng)攻擊后出現(xiàn)抗原調(diào)變機(jī)制，也使腫瘤逃避宿主的免疫攻擊而得以生長發(fā)展。近年研

3、究表明P53基因錯義突變幾乎發(fā)生在人類一半腫瘤中，腫瘤細(xì)胞過量表達(dá)作為腫瘤相關(guān)抗原(tumorassociatedantigen，TAA)的突變P53蛋白已經(jīng)在多種腫瘤細(xì)胞系得到證實，并且CD8+的細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(cytotoxicTlymphocyte，CTL)細(xì)胞系能夠通過識別腫瘤細(xì)胞HLA-A*0201位點以識別其P53肽，并且近年有報道在部分皮膚鱗狀細(xì)胞癌患者體內(nèi)P53是CD8+T淋巴細(xì)胞作用的靶位點。我們實驗室以往研究結(jié)果提

4、示：p53基因突變是賁門癌癌變過程中的重要分子機(jī)制之一，對P53蛋白的檢測從一定程度上能夠反映p53基因的突變情況。另外，本實驗室通過對賁門癌高發(fā)區(qū)人群的初步研究，認(rèn)為賁門癌變是一多階段演進(jìn)過程。在這一發(fā)病模式中各階段，常常在光學(xué)顯微鏡下觀察到大量成團(tuán)淋巴細(xì)胞浸潤。但在賁門癌中，這些浸潤淋巴細(xì)胞的特征及其與腫瘤P53蛋白有無相關(guān)性尚不清楚。 本研究旨在通過檢測河南賁門癌高發(fā)區(qū)GCA及正常組組織浸潤淋巴細(xì)胞CD4、CD8和γδT細(xì)

5、胞的變化及腫瘤組織P53蛋白的表達(dá)情況，進(jìn)而探討賁門癌患者免疫功能狀態(tài)、T細(xì)胞亞群的改變情況及作為腫瘤抗原P53蛋白的改變與腫瘤浸潤T淋巴細(xì)胞的相關(guān)性，從而加深對賁門癌變機(jī)制的了解。 研究對象和方法20例賁門癌和20例癌旁正常組織標(biāo)本取自河南賁門癌高發(fā)區(qū)林州地區(qū)賁門癌手術(shù)切除標(biāo)本。所有賁門癌患者排除免疫缺陷等其它疾病，并術(shù)前均未接受任何放療或化療。所有標(biāo)本經(jīng)-80度冰箱固定、連續(xù)常規(guī)冰凍切片，進(jìn)行組織病理學(xué)診斷和免疫組織化學(xué)分析

6、。免疫組化采用卵白素-生物素-辣根過氧化氫酶復(fù)合物(ABC)法，檢測賁門癌組織及正常組織浸潤淋巴細(xì)胞CD4，CD8，γδT表達(dá)和賁門癌P53蛋白表達(dá)及其相互關(guān)系。統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件處理，采用T檢驗和Pearson相關(guān)分析，檢驗標(biāo)準(zhǔn)取α=0.05。 結(jié)果1.臨床病理資料分析20例賁門癌和20例癌旁正常組織標(biāo)本中配對標(biāo)本為14例。賁門癌組患者男性15例(平均年齡58±9，范圍為40-70歲)，女性5例(平均年齡6

7、0±13，范圍為38-65歲)；正常組患者男性15例(平均年齡59±10，范圍為40-70歲)，女性5例(平均年齡57±10，范圍為38-63歲)。20例賁門癌組組織均經(jīng)病理組織學(xué)證實為原發(fā)性賁門腺癌，其分化程度均為中、低分化，分別為65％(13/20)和35％(7/20)；賁門癌TNM分期為：Ⅱ期13例(65％)，Ⅲ期5例(25％)，Ⅳ期2例(10％)；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為：6例(30％)賁門腺癌出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，14例(70％)無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

8、 2.免疫組化結(jié)果20例賁門癌組織和20例正常組織中，20例賁門癌組織CD8陽性細(xì)胞和20例γδT陽性細(xì)胞數(shù)每平均視野(-x±s)為68±30和8±4，明顯高于正常組織CD8陽性細(xì)胞數(shù)(52±18)和研T陽性細(xì)胞數(shù)(5±3)；賁門癌組織CD4陽性細(xì)胞數(shù)為68±28，明顯低于正常組織陽性細(xì)胞數(shù)(90±35)；但是，正常組織CD4+/CD8+細(xì)胞比值為1.88±0.76，明顯高于賁門癌組織(1.01±0.06)；差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P

9、＜0.05)。在14例配對標(biāo)本中，CD4陽性細(xì)胞在賁門癌組織中較正常組織中減少的為12例，其表達(dá)一致率為86％，而CD8和γδT陽性細(xì)胞在賁門癌組織中較正常組織中增多的分別為11例和13例，其表達(dá)一致率分別為79％和93％。 CD4和CD8免疫陽性細(xì)胞數(shù)在中分化GCA組織中每視野平均(-x±s)分別為72±33和73±34，高于其在低分化GCA患者組織中表達(dá)(60±16和59±16)；γδT免疫陽性細(xì)胞數(shù)在低分化GCA組織為9±

10、4，高于中分化GCA組織陽性細(xì)胞數(shù)(7±4)；而CD4/CD8陽性細(xì)胞比值在中分化GCA組織為1.01±0.07，低于低分化GCA組織CD4/CD8陽性細(xì)胞比值(1.02±0.03)；但各指標(biāo)兩組間無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。Ⅱ期GCA組織中CD4、CD8和γδT免疫陽性細(xì)胞數(shù)每視野平均(-x±s)分別為72±33、73±35和8±4，高于Ⅲ-Ⅳ期GCA組織中各指標(biāo)表達(dá)(61±17、59±16和6±4)；而CD4/CD8陽性細(xì)胞比值在

11、Ⅱ期GCA組織為1.00±0.08，低于Ⅲ-Ⅳ期GCA組織CD4/CD8陽性細(xì)胞比值(1.02±0.05)，但各指標(biāo)兩組間無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移賁門癌組織CD4、CD8和γδT免疫陽性細(xì)胞數(shù)每視野平均(-x±s)分別為71±32、72±34和8±4，高于其在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)(62±19、60±18和7±4)；而無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中CD4/CD8陽性細(xì)胞比值為1.00±0.07，低于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中比值(

12、1.03±0.05)；但各指標(biāo)兩組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 CD4和CD8免疫陽性細(xì)胞數(shù)在老年組GCA組織中每視野平均(-x±s)分別為77±31和75±31，高于其在青中年組GCA組織中表達(dá)(58±23和60±27)；γδT免疫陽性細(xì)胞數(shù)(-x±s)在青中年組GCA組織為8±5，高于老年組GCA組織陽性細(xì)胞數(shù)(7±4)；而CD4/CD8陽性細(xì)胞比值在青中年組GCA組織為1.00±0.09，低于老年組GCA組織CD4

13、/CD8陽性細(xì)胞比值(1.02±0.05)，但各指標(biāo)兩組間無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。CD4和CD8免疫陽性細(xì)胞數(shù)在男性GCA組織中每視野平均(-x±s)分別為69±32和69±34，高于其在女性GCA患者組織中表達(dá)(66±15和65±14)；γδT免疫陽性細(xì)胞數(shù)在女性GCA組織為8±2，高于男性GCA組織陽性細(xì)胞數(shù)(7±4)；而CD4/CD8陽性細(xì)胞比值在男性GCA組織為1.01±0.08，低于女性比值(1.02±0.03)；但各指

14、標(biāo)兩組間無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 20例賁門癌組織，P53染色陽性15例(75％)，P53染色陰性5例(25％)。CD8和γδT免疫陽性細(xì)胞數(shù)在P53陽性組每視野平均(-x±s)為67±18和9±4，明顯高于P53陰性組(48±11和3±2)，兩指標(biāo)兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；而CD4免疫陽性細(xì)胞數(shù)在P53陽性組每視野平均(-x±s)為66±16，低于P53陰性組(68±29)，兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.

15、05)。15例賁門癌組織中癌細(xì)胞P53陽性細(xì)胞數(shù)為99±22，其與CD8，δγT免疫陽性浸潤淋巴細(xì)胞數(shù)經(jīng)Pearson相關(guān)分析，認(rèn)為賁門癌腫瘤細(xì)胞P53陽性細(xì)胞數(shù)與CD8陽性浸潤淋巴細(xì)胞數(shù)呈正相關(guān)，Pearson系數(shù)為0.933(P＜0.005)。 結(jié)論1.賁門癌組織CD4/CD8陽性T細(xì)胞比值明顯低于正常賁門組織，而γδT細(xì)胞增多，提示賁門癌患者免疫功能增強(qiáng)，并可能與賁門癌變有關(guān)。 2.賁門癌組織中，P53陽性癌細(xì)胞與