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1、目的:通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)明確mTOR-I對(duì)CD4及CD8 T細(xì)胞細(xì)胞因子IL-2及INF-γ分泌功能的影響。從而探討mTOR-I對(duì)T淋巴細(xì)胞亞型(CD4及CD8 T細(xì)胞)免疫功能的影響。并了解其免疫抑制功能與環(huán)孢素A相比是否有差異。
方法:提取小鼠脾臟并分離淋巴細(xì)胞,通過(guò)流式細(xì)胞分選技術(shù)分離出CD4和CD8 T細(xì)胞,單獨(dú)培養(yǎng)。按對(duì)照組、環(huán)孢素A組以及mTOR-I雷帕霉素(Rapa)組分組,共培養(yǎng)48小時(shí)。通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR
2、法檢測(cè)各組IL-2及INF-γ mRNA的表達(dá)。
結(jié)果:提取的小鼠脾臟淋巴細(xì)胞經(jīng)流式細(xì)胞儀分選,其中CD4 T細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)12.1%,CD8T細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)5.7%。共培養(yǎng)48小時(shí)后行Real-time PCR示:CD4T細(xì)胞中Rapa處理組IL-2 mRNA相對(duì)表達(dá)量為對(duì)照組的65.0%,CsA處理組IL-2 mRNA相對(duì)表達(dá)量為對(duì)照組的62.0%;CD8細(xì)胞中Rapa處理組IL-2 mRNA相對(duì)表達(dá)量為對(duì)照組的40.5%
3、,CsA處理組IL-2 mRNA相對(duì)表達(dá)量為對(duì)照組的42.7%。CD4T細(xì)胞中Rapa處理組INF-γ mRNA相對(duì)表達(dá)量為對(duì)照組的66.3%,CsA處理組INF-γ mRNA相對(duì)表達(dá)量為對(duì)照組的52.2%;CD8細(xì)胞中Rapa處理組INF-γ mRNA相對(duì)表達(dá)量為對(duì)照組的49.5%,CsA處理組INF-γ mRNA相對(duì)表達(dá)量為對(duì)照組的42.4%,各組間運(yùn)用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),P<0.05。CD4及CD8 Rapa和CsA組IL-2、INF
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