草魚T細(xì)胞表面分子CD4L和CD8α-β的cDNA克隆及其免疫學(xué)特性研究.pdf

1、在哺乳動(dòng)物中，T淋巴細(xì)胞表面分子標(biāo)記CD4和CD8將T細(xì)胞分為輔助性T細(xì)胞和細(xì)胞毒性T細(xì)胞兩種主要亞群。具體地，CD4和CD8分子分別通過與自身MHCⅠ類分子和Ⅱ類分子的恒定區(qū)結(jié)合，加強(qiáng)T細(xì)胞與APC或靶細(xì)胞的相互作用以及TCR-CD3信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)。為獲悉它們?cè)隰~類的分子結(jié)構(gòu)和可能的功能信息，本課題克隆了草魚CD4L、CD8α和CD8β基因，得到了它們的全長(zhǎng)cDNA序列。預(yù)測(cè)的蛋白質(zhì)擁有和哺乳動(dòng)物以及其它魚類相似的結(jié)構(gòu)，例如都含有免疫球蛋

2、白超家族成員。通過半定量PCR我們檢測(cè)到CD4L、CD8α和CD8β基因在草魚胸腺中有最高表達(dá)量，其次在鰓、頭腎、腎和小腸等其它免疫相關(guān)組織中有高表達(dá)。為進(jìn)一步明確CD4L、CD8α和CD8β的免疫學(xué)功能，本課題以草魚外周血淋巴細(xì)胞（PBLs）為模型，發(fā)現(xiàn)PHA明顯上調(diào)T細(xì)胞的表面分子標(biāo)記CD4L、CD8α和CD8β的mRNA水平的表達(dá)，然而LPS無此作用。這一結(jié)果驗(yàn)證了PHA和LPS分別特異作用于魚類T和B淋巴細(xì)胞的性質(zhì)。
　　

3、NF-κB信號(hào)通路對(duì)于哺乳動(dòng)物T細(xì)胞的功能至關(guān)重要，而且不同的NF-κB家族成員在T細(xì)胞中發(fā)揮不同的作用，因此研究NF-κB信號(hào)通路十分必要。本課題克隆了草魚NF-κB信號(hào)通路中的抑制蛋白IκBα，進(jìn)一步在草魚PBLs中，發(fā)現(xiàn)LPS從3 h開始刺激IκBα的表達(dá)，12 h后達(dá)到頂峰然后衰減，這和哺乳動(dòng)物中的IκBα的自調(diào)控作用方式是一致的。而PHA從1 h開始呈現(xiàn)持續(xù)上調(diào)IκBα的表達(dá)。結(jié)果還顯示NF-κB的抑制劑可以抑制LPS和PHA