腦缺血小鼠大腦皮層CD4、CD8免疫反應觀察及脾T淋巴細胞亞群變化.pdf

1、背景和目的：免疫機制與中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷、腫瘤、缺血以及退變性疾病密切相關(guān)。急性缺血性腦卒中是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的急性損傷性病變，有研究表明，免疫機制參與了缺血性腦損傷的發(fā)生發(fā)展過程。腦缺血時，激活的小膠質(zhì)細胞，浸潤的外周血多形核白細胞、中性粒細胞和單核細胞等炎性細胞介入腦缺血性損傷的病理過程外，機體的免疫細胞水平也有變化。當T淋巴細胞亞群的數(shù)量和功能異常時，機體可產(chǎn)生免疫紊亂而導致機體發(fā)病。T細胞亞群與腦缺血的聯(lián)系近年來倍受重視。本實驗研究的

2、主要目的在于觀察腦缺血后腦組織淋巴細胞浸潤情況及脾臟T細胞亞群的變化，探討淋巴細胞及其亞群在缺血性腦損傷中的作用。 方法：研究對象為健康成年雄性Balb/c小鼠，光化學法建立小鼠局灶性腦缺血模型，分為對照組、單純光敏劑組和腦缺血組，各組又分為腦缺血后6h、1d、3d和7d四個亞組。在處死前半小時，無菌條件下取出脾臟，制備單個核細胞懸液，用于流式細胞儀檢測脾臟CD4+、CD8+T淋巴細胞百分率及CD4+/CD8+的比值。在相應時間

3、點處死動物，通過Nissl染色觀察受損腦區(qū)皮層的形態(tài)學變化，免疫組織化學染色檢測皮層CD4和CD8陽性細胞的反應。 結(jié)果：Nissl染色顯示：對照組和單純光敏劑組皮層無損傷，細胞分布和形態(tài)均正常，兩組之間無差異。與對照組相比，缺血組6h就出現(xiàn)損傷區(qū)，1d和3d可見梗死區(qū)與周圍正常腦組織有一明顯的分界線，缺血周邊皮層神經(jīng)元數(shù)量明顯減少。7d可見損傷周圍有大量細胞浸潤。免疫組織化學染色顯示：單純光敏劑組與對照組無差異。腦缺血組與對照

4、組相比，CD8免疫組織化學染色3d時可見圓形、無明顯突起細胞和分支狀突起的陽性細胞(P＜0.05)，主要分布于缺血周邊區(qū)。7d時陽性細胞數(shù)量明顯增加(P＜0.001)。CD4免疫組織化學染色在對照組、單純光敏劑組和腦缺血組均為陰性。流式細胞儀檢測脾臟T淋巴細胞亞群，與對照組相比，腦缺血組CD4+T淋巴細胞百分率在6h、1d和3d時明顯降低(P＜0.001)，CD8+T淋巴細胞百分率在6h、1d和3d時降低(P＜0.05)。CD4+/CD

5、8+的比值在6h、3d和7d降低(P＜0.05)，在1d時顯著降低(P＜0.001)。 結(jié)論：1.在腦缺血超早期(6h內(nèi))，缺血中心區(qū)神經(jīng)細胞數(shù)量明顯減少，提示缺血一旦發(fā)生，即很快對腦細胞產(chǎn)生影響。因此，缺血性腦梗塞一旦發(fā)生應及早救治，才能更有效地挽救半暗帶神經(jīng)元。 2.腦缺血周邊區(qū)CD8抗原的高表達，啟動局灶的免疫反應。提示腦缺血的組織損傷過程有免疫反應參與。CD4抗原在本實驗未觀察到陽性表達，在腦缺血損傷中的作用還需