不同情況下大鼠腦組織中MHC、CD4及CD8分子表達(dá)的變化及意義.pdf

1、第一部分不同年齡大鼠腦組織中MHC、CD4及CD8分子的表達(dá)及其意義 目的：觀察不同年齡大鼠腦組織中MHCI、MHCII、CD4及CD8分子的表達(dá)，并探討其意義。 方法：將實(shí)驗(yàn)大鼠按胎齡和日齡分為7組：E15d、E19d、POd、PTd、P14d、P28d及老年組(24月齡)，每組6只，共42只大鼠。經(jīng)灌流取材冰凍切片，選取頂葉大腦皮質(zhì)、海馬、黑質(zhì)、紋狀體、小腦及脈絡(luò)叢等部位，采用免疫組化染色方法，檢測(cè)MHCI、MHCI

2、I、CD4和CD8分子在上述部位的表達(dá)情況。 結(jié)果：(1)E15d大鼠腦組織未見(jiàn)MHCI類分子的表達(dá)；其他年齡組在結(jié)締組織和脈絡(luò)叢有MHCI類分子的表達(dá)。其中從P0～P14d組海馬和頂葉大腦皮質(zhì)神經(jīng)元上MHCI類分子的表達(dá)隨著日齡的增加而逐漸升高，P14d組的表達(dá)最高(P<0.05)；P28d組的表達(dá)明顯下降(P<0.05)：老年組大鼠海馬神經(jīng)元上的表達(dá)再次升高(P<0.05)。(2)E15d組大鼠腦組織中未見(jiàn)MHCII、CD4

3、和CD8分子的表達(dá)；其他年齡組MHCII、CD4和CD8除在結(jié)締組織和脈絡(luò)叢表達(dá)外，在神經(jīng)元上未見(jiàn)表達(dá)。(3)各年齡組在小腦皮質(zhì)神經(jīng)元、黑質(zhì)、紋狀體等區(qū)域未見(jiàn)MHCI、MHCII、CD4和CD8分子的表達(dá)。 結(jié)論： (1)胚胎后期腦內(nèi)開始有MHC、CD4和CD8分子的表達(dá)，表明此時(shí)腦內(nèi)已有可能出現(xiàn)免疫反應(yīng)； (2)在新生鼠及出生早期，部分皮質(zhì)和海馬神經(jīng)元上有MHCI類分子的表達(dá)，可能與調(diào)節(jié)神經(jīng)元活動(dòng)和突觸可塑性連接有關(guān)； (3)

4、老年組大鼠MHCI類分子在海馬神經(jīng)元上的表達(dá)升高，可能與神經(jīng)元的功能衰退和記憶識(shí)別能力下降有關(guān)。 第二部分帕金森病大鼠及NSCs聯(lián)合GDNF移植后腦組織中MHC、CD4及CD8分子的表達(dá)變化 目的：觀察帕金森病(PD)模型大鼠黑質(zhì)區(qū)MHCI、CD4和CD8免疫分子的表達(dá)變化和NSCs聯(lián)合GDNF移植后移植區(qū)及免疫反應(yīng)情況并探討其意義。 方法： (1)將成功PD模型大鼠按時(shí)程分為3組：7d、14d、30d，每組4只

5、，共12只；正常對(duì)照組4只。經(jīng)灌流取材冰凍切片，選取黑質(zhì)區(qū)，采用免疫組化染色方法，檢測(cè)MHCI、CD4和CD8分子表達(dá)情況。(2)取E14.5d大鼠腹側(cè)中腦(VM)組織進(jìn)行原代培養(yǎng)，經(jīng)鑒定為具有增殖分化能力的神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)后，制備成細(xì)胞懸液，加入GDNF，借助腦立體定位儀移植到PD模型大鼠的紋狀體內(nèi)。按照移植的時(shí)間點(diǎn)分為3組：2w、4w、6w，經(jīng)行為學(xué)檢測(cè)后分批處死，每組4只，共12只；假手術(shù)對(duì)照組4只。經(jīng)灌流取材冰凍切片，選取

6、移植針道區(qū)及周圍區(qū)域，采用免疫組化染色方法，檢測(cè)MHCII、CD4和CD8分子表達(dá)情況。 結(jié)果：(1)PD模型大鼠組，MHCI、CD4和CD8陽(yáng)性細(xì)胞在黑質(zhì)區(qū)可見(jiàn)表達(dá)，與7d組比較，14d和30d組這三種陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)量升高(P<0.05)，其中30d組最高(P<0.05)；紋狀體區(qū)未見(jiàn)表達(dá)；對(duì)照組在各時(shí)間點(diǎn)均未見(jiàn)上述三種陽(yáng)性細(xì)胞。(2)NSCs聯(lián)合GDNF組，移植區(qū)及周圍區(qū)域；MHCII、CD4和CD8陽(yáng)性細(xì)胞在2w組大量出現(xiàn)

7、，4w組下降(P<0.05)，6w組基本消失(P<0.05)；假手術(shù)對(duì)照組在各時(shí)間點(diǎn)均未見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞。 結(jié)論：PD模型大鼠損毀側(cè)黑質(zhì)區(qū)存在MHCI、CD4和CD8陽(yáng)性細(xì)胞，可能是由于該側(cè)多巴胺(DA)能神經(jīng)元受到損害，引起周圍的小膠質(zhì)細(xì)胞等激活表達(dá)MHCl分子，同時(shí)出現(xiàn)T淋巴細(xì)胞滲透進(jìn)入黑質(zhì)區(qū)，因?yàn)檫@三種陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)變化與同時(shí)期DA能神經(jīng)元喪失程度呈正相關(guān)。NSCs聯(lián)合GDNF移植組在2w、4w組仍然出現(xiàn)MHCII、CD4和CD