組蛋白甲基化抑制劑DZNep對移植免疫中CD8+T細胞調(diào)控作用的研究.pdf

1、目的:在通過同種異基因造血干細胞移植(Allogeneic-hematopoietic stem cell transplantation,Allo-HSCT)來誘導造血細胞嵌合體形成進而誘導免疫耐受的過程中,研究組蛋白甲基化抑制劑DZNep是否可以預防供體源性CD8+T細胞介導的移植物抗宿主病(Graft-versus-host disease,GVHD)的發(fā)生,并進一步探討DZNep對Allo-HSCT中供體源性CD8+T細胞的調(diào)控

2、作用及其機制。
　　方法:建立供/受體間基因型為MHC相同而miHA不同的小鼠Allo-HSCT模型,研究DZNep處理對此模型中由供體源性CD8+T細胞所介導的GVHD的影響。通過比較DZNep處理/未處理受體小鼠Allo-HSCT后體重變化、長期生存率、GVHD臨床評分及GVHD靶器官/組織病理學改變上的差異,評價DZNep在預防GVHD方面的療效;利用FACS技術對Allo-HSCT后多個時間點的供體源性CD8+T細胞進行表

3、型分析,進而研究DZNep對供體源性CD8+T細胞的調(diào)控作用及其調(diào)控機制;通過對Allo-HSCT后受體小鼠的胸腺細胞和骨髓細胞進行FACS等相關分析,評價DZNep對術后嵌合體狀態(tài)形成的影響及DZNep的體內(nèi)毒副作用。
　　結(jié)果:DZNep可以顯著改善受體小鼠體重降低程度(p＜0.05)、長期生存率(p＜0.05)、GVHD臨床評分(p＜0.05)及靶器官/組織病理學改變,因而能夠預防供體源性CD8+T細胞介導的GVHD的發(fā)生;

4、通過機制研究發(fā)現(xiàn),DZNep可以抑制供體源性CD8+T細胞的早期活化及受體抗原特異性的CD8+T細胞的增殖(p＜0.05),從而能夠減少脾臟、淋巴結(jié)中供體源性CD8+T細胞的絕對數(shù)量(p＜0.05);細胞表型分析顯示,DZNep可以抑制術后第8天(D8)供體源性CD8+T細胞上TNF-α及IL-2的表達水平(p＜0.05),卻能增加術后第14天(D14)供體源性CD8+T細胞上IL-2的表達水平(p＜0.05);雖然DZNep對脾臟中供

5、體源性CD8+T細胞上IFN-γ、FasL、Trail、GranzymeB(GzmB)的表達水平無明顯影響(p＞0.05),卻可以顯著抑制肝臟中CD8+T細胞上IFN-γ的表達(p＜0.05);由于脾臟中供體源性CD8+T細胞的絕對數(shù)量的顯著減少(p＜0.05),脾臟中供體源性IFN-γ+CD8+T細胞、FasL+CD8+T細胞、Trail+CD8+T細胞、GzmB+CD8+T細胞及TNF-α+CD8-T細胞的絕對數(shù)量在DZNep處理組

6、顯著減少(p＜0.05);DZNep還顯著抑制了導致GVHD發(fā)生的供體源性效應性CD8+T細胞的生成(p＜0.05);此外DZNep在調(diào)控供體源性CD8+T細胞免疫反應性的同時并未影響受體體內(nèi)造血細胞嵌合體的形成。
　　結(jié)論:DZNep通過調(diào)控Allo-HSCT中供體源性CD8+T細胞的免疫反應性,在阻止供體源性CD8+T細胞介導的GVHD發(fā)生的同時實現(xiàn)了造血細胞嵌合體的形成。因此,我們發(fā)現(xiàn)了組蛋白甲基化抑制劑DZNep在預防Al