組蛋白乙酰化酶p300抑制劑對t(8;21)AML細胞的生物學行為的作用及機制研究.pdf

1、背景：急性髓系白血病(Acute Myeloid Leukemia，AML)是常見的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，臨床上約15％的AML病人伴有t(8；21)(q22；q22)染色體異常，而其編碼的異常蛋白AML1-ETO被證實在t(8；21)陽性急性髓系白血病的發(fā)生發(fā)展中起到了重要的作用。最新研究證實組蛋白乙?；竝300在AML1-ETO對下游基因的激活過程中起到了重要的輔助作用，故p300很有可能成為有潛力的抗白血病治療新靶點。
　　

2、 目的：研究組蛋白乙?；竝300抑制劑C646對t(8；21)陽性急性髓系白血病細胞生物學行為的作用及機制。
　　 方法：第一部分，應用Cell Count Kit-8及克隆集落形成實驗等方法，檢測組蛋白乙酰化酶p300抑制劑C646在體外對t(8；21)AML細胞系的增殖和克隆形成能力的作用；應用流式細胞技術，檢測C646對AML細胞系凋亡和周期的作用。第二部分，應用熒光定量PCR以及Western Blot技術，在mRNA

3、以及蛋白水平檢測C646處理后t(8；21)AML細胞系內(nèi)BCL-2及組蛋白H3乙酰化水平的變化。第三部分，建立△AE轉基因白血病小鼠模型，采集小鼠脾臟白血病細胞，采用C646處理，觀察細胞體外克隆形成能力，并經(jīng)尾靜脈回輸至C57/BL6J小鼠體內(nèi)，觀察小鼠生存期。
　　 結果：第一部分，在t(8；21)陽性的Kasumi-1以及SKNO-1細胞系中，C646處理24h后細胞增殖及克隆集落形成能力即受到明顯的抑制，且這種抑制作用

4、可持續(xù)72h或以上(P<0.01)，并隨C646濃度的增高而顯著提高(P<0.01)，但延長C646處理時間并不能提高相應的作用(P>0.05)；C646處理可對Kasumi-1、SKNO-1和穩(wěn)定表達AML1-ETO的U937-AE白血病細胞系的凋亡產(chǎn)生誘導作用，但對AML1-ETO陰性的U937細胞系無顯著誘導凋亡作用；C646在較低濃度下即可對AMLl-ETO陽性的AML細胞系產(chǎn)生明顯的細胞周期阻滯的作用。
　　 第二部分

5、，采用10μM的C646處理Kasumi-1、SKNO-1細胞系24h，即可在mRNA水平顯著的抑制BCL-2基因的表達(P<0.05)，但提高C646濃度以及延長處理時間沒有明顯提高其對BCL-2 mRNA表達的抑制作用；Western Blot檢測提示在該濃度下C646還可明顯抑制BCL-2的蛋白表達，同時降低組蛋白H3的乙酰化水平。第三部分，采用C646和DMSO分別在體外處理△AE轉基因小鼠脾臟白血病細胞，經(jīng)C646處理的白血病

6、細胞的克隆形成能力與DMSO處理的對照組細胞相比明顯減弱，將兩組細胞分別經(jīng)尾靜脈回輸至小鼠體內(nèi)，接受C646處理后白血病細胞的小鼠生存期較DMSO對照組明顯延長(P<0.01)。
　　 結論：1.組蛋白乙酰化酶p300抑制劑C646可以在體外抑制AML1-ETO陽性的AML細胞系的增殖和克隆形成能力；2.C646對t(8；21)AML細胞生物學功能的影響強度在一定范圍內(nèi)與劑量呈強依賴性，但延長處理時間并不能增強該效應；3.C64

7、6對AML1-ETO陽性白血病細胞的誘導凋亡和增加細胞周期阻滯的作用是導致細胞增殖和克隆形成能力受到抑制的原因之一；4.C646可通過降低組蛋白乙?；?，抑制AML1-ETO下游基因Bc1-2的激活作用，導致BCL-2基因的mRNA以及蛋白表達水平下降，從而發(fā)揮對AML1-ETO陽性細胞系細胞生物學功能的影響；5.C646體外處理可以抑制△AE轉基因白血病小鼠模型原代白血病細胞的體外克隆形成能力；并延長小鼠生存期。上述研究結果提示組蛋