靶向CD4分子的小分子免疫抑制劑的篩選及活性鑒定.pdf

1、同種異體器官(骨髓、腎、肝、胰腺等)移植已成為治療惡性腫瘤或器官衰竭的有效治療手段之一，但移植后的并發(fā)癥如移植物抗宿主病(graft versushost disease，GVHD)仍是影響移植成功率的主要因素之一。研究證明T淋巴細(xì)胞及它所介導(dǎo)的免疫應(yīng)答效應(yīng)與GVHD的發(fā)生和發(fā)展有著密切的關(guān)系；通過對免疫系統(tǒng)包括T細(xì)胞功能的抑制可有效預(yù)防或治療GVHD已得到證實(shí)。近年來的研究表明CD4<'+>T細(xì)胞是啟動(dòng)移植物排斥反應(yīng)中最重要的細(xì)胞亞群

2、，CD4<'+>T細(xì)胞表面CD4分子與MHC-Ⅱ類分子之間的相互作用是CD4<'+>T細(xì)胞激活并介導(dǎo)免疫應(yīng)答反應(yīng)的關(guān)鍵。研制靶向CD4分子的小分子藥物，特異性阻斷由MHC-Ⅱ類分子與CD4<'+>T細(xì)胞相互作用所介導(dǎo)的移植排斥反應(yīng)是目前免疫學(xué)和藥學(xué)所關(guān)注的焦點(diǎn)。 基于CD4分子與MHC-Ⅱ類分子之間相互作用的立體構(gòu)型的理論分析，李松教授研究組應(yīng)用計(jì)算機(jī)虛擬篩選以及分子對接技術(shù)從非肽類有機(jī)化合物庫中篩選獲得了一組靶向CD4分子D1

3、功能表位的小分子化合物，為本研究課題提供了可用于免疫抑制研究靶向CD4的小分子化合物。本課題擬通過體外生物學(xué)試驗(yàn)從19種化合物中篩選具有免疫抑制作用的小分子化合物，并建立同種異基因骨髓移植動(dòng)物模型，體內(nèi)進(jìn)一步評價(jià)靶向CD4分子的小分子化合物對GVHD的預(yù)防作用。 本課題首先應(yīng)用表達(dá)CD4分子的HPB-ALL細(xì)胞(T淋巴白血病細(xì)胞系，CD4<'+>陽性率≥90％)和表達(dá)MHC-Ⅱ類分子的Datldi細(xì)胞(B淋巴白血病細(xì)胞系，MHC

4、-Ⅱ類分子陽性率≥90％)、健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞的混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)(MLR)方法，對虛擬篩選獲得的19個(gè)小分子化合物進(jìn)行檢測，MTT法結(jié)果證實(shí)19個(gè)化合物中的5個(gè)(JK、E4、J4、A5和J2)化合物具確劑量依賴性的免疫抑制作用，外周血MLR<'3>H-TdR摻入法的結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了JK、E4、J4、A5和J2的良好免疫抑制作用。為了進(jìn)一步驗(yàn)證具有較好免疫抑制作用的J2化合物對GVHD的預(yù)防和治療效應(yīng)，本課題以近交系C57BL/6(H

5、-2<'b>)小鼠作為供者，BALB/c(H-2<'d>)小鼠作為受者，給予受者鼠8Gy<'60>Co全身照射，4-6小時(shí)后進(jìn)行骨髓細(xì)胞與脾細(xì)胞移植。通過對受體鼠H-2<'b>基因的檢測、生存周期和器官組織的病理學(xué)分析，結(jié)果初步證實(shí)本課題所建立的異基因骨髓移植動(dòng)物模型具有急性移植物抗宿主病(aGVHD)的基本特征，可用于對以上小分子化合物預(yù)防或治療aGVHD的評價(jià)。在此動(dòng)物模型上觀察了化合物J2口服給藥后對移植后aGVHD的預(yù)防和治療作