CAPN10基因單核苷酸多態(tài)性與西南地區(qū)人群2型糖尿病相關(guān)性研究.pdf

1、糖尿病(diabetes mellitus，DM)是目前世界上普遍危害人類健康的慢性疾病之一。作為DM的主要類型，2型糖尿病(T2DM)的主要病理機(jī)制是胰島素抵抗導(dǎo)致外周組織對(duì)葡萄糖的利用減少和胰島β細(xì)胞功能損害，是一種具明顯異質(zhì)性的多因素、多基因遺傳病，其遺傳方式和發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，許多微效基因的變異都會(huì)增加其發(fā)病率。 鈣蛋白酶10(CAPN10)是被定位克隆的與T2DM相關(guān)的基因，位于T2DM染色體2q37-3中，該基因全長(zhǎng)

2、31 kb，含有15外顯子和14個(gè)內(nèi)含子。它是細(xì)胞內(nèi)鈣依賴的半胱氨酸蛋白酶，代表結(jié)構(gòu)上與鈣蛋白有關(guān)的超家族，在包括骨骼肌、肝臟和胰腺的許多組織中表達(dá)。在生理狀態(tài)下其可能參與細(xì)胞骨架調(diào)整、酶的修飾及多種細(xì)胞過程，與組織胰島素敏感性、血糖水平等相關(guān).CAPN10基因存在很多多態(tài)性位點(diǎn)，如：SNP43、SNP19、SNP64等。在世界不同地區(qū)不同人種中，各位點(diǎn)等位基因出現(xiàn)的頻率有明顯差異，故與T2DM的相關(guān)性也存在差異。目前尚無(wú)有關(guān)該基因與西

3、南地區(qū)漢族人群T2DM的關(guān)系的報(bào)道。 本文研究CAPN1O基因的三個(gè)SNPs位點(diǎn)與西南地區(qū)漢族人群T2DM的關(guān)系，以評(píng)價(jià)該基因是否為西南地區(qū)漢族人群T2DM的易感基因。 研究目的:研究西南地區(qū)漢族人群CAPN10基因3個(gè)SNPs位點(diǎn)的基因頻率、基因型頻率及其組成單體型的分布特征。研究CAPN10基因SNPs及其單體型頻率與T2DM的關(guān)系。 研究方法: (1)通過美國(guó)國(guó)家生物信息中心(NCBI)的GenBa

4、nk獲取CAPN10基因序列及其相應(yīng)位點(diǎn)的SNP信息。利用Primer Premier 5.0引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)相應(yīng)引物，并經(jīng)NCBI的Blast 2.0軟件檢驗(yàn)其特異性。 (2)利用雙向等位特異性PCR技術(shù)檢測(cè)T2DM病例組及對(duì)照組CAPN10基因3個(gè)SNPs位點(diǎn)的基因型。 (3)計(jì)算T2DM病例組及對(duì)照組CAPN10基因3個(gè)SNPs位點(diǎn)的基因頻率、基因型頻率和單體型頻率，分析CAPN10基因多態(tài)性特征。 研究結(jié)

5、果: (1)進(jìn)一步證實(shí)雙向等位特異性PCR技術(shù)檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性的可行性，該法具有操作簡(jiǎn)便、費(fèi)用低廉、結(jié)果穩(wěn)定的優(yōu)點(diǎn)。 (2)CAPN10基因三個(gè)SNPs(SNP43、SNP44、SNP56)優(yōu)勢(shì)等位基因(Allele 1)的頻率在病人組及對(duì)照組分別為：0.9306/0.8622、0.1910/0.0969、0.6007/0.4496。兩組等位基因頻率分布有顯著性差異(p值均小于0.05)。 (3)SNP43、S

6、NP44、SNP56三位點(diǎn)等位基因型頻率在病人組及對(duì)照組分別為：SNP43 G/G型為0.8611/0.7347、A/G型為0.1389/0.2551、A/A型為0.000/0.0102，兩組等位基因型頻率分布有顯著性差異(p＜0.05)。SNP44 T/T型為0.6250/0.8061、C/T型為0.3681/0.1939、C/C型為0.0069/0.0000，兩組等位基因型頻率分布有顯著性差異(p＜0.05)。SNP56 G/G型為

7、0.1597/0.2857、A/G型為0.4791/0.5306、A/A型為0.3611/0.1836，兩組等位基因型頻率分布有顯著性差異(p＜0.05)。 (4)三個(gè)SNPs位點(diǎn)可以組成八種單體型，在中國(guó)西南地區(qū)漢族人群中最常見的是GTA、GTG、GCA，它們?cè)诓∪私M及對(duì)照組的頻率分別為0.448/0.378、0.297/0.388、0.110/0.037，p值分別為0.1182320、0.038156、0.003984。單體

8、型ATG*、GCA*、GTG*在病人組及正常對(duì)照組的頻率分別為0.024/0.098、0.110/0.037、0.297/0.388，p值分別為0.000377、0.003984、0.038156，分布有顯著差異。提示單體型ATG*、GCA*、GTG*可能與中國(guó)西南地區(qū)漢族人群T2DM有關(guān)。 結(jié)論: (1)雙向等位特異性PCR技術(shù)是一種較為簡(jiǎn)便、特異性較高、費(fèi)用少、便于推廣的SNP檢測(cè)方法，尤其在已知SNP研究中較有優(yōu)勢(shì)