MAZ基因在前列腺癌中的功能及其作用機制的研究.pdf

1、背景：
　　 前列腺癌(Prostatecancer，PCa)是男性的一個重要疾病，每年在全球導致大量的男性死亡。在美國前列腺癌發(fā)病率占男性惡性腫瘤的第一位，死亡率占第二位，僅次于肺癌。我國前列腺癌發(fā)病率較低，但是近年來隨著人民生活水平的提高、人口老齡化、飲食結構的變化以及醫(yī)療檢測水平的提高，PCa發(fā)病率正呈逐年上升趨勢。PCa正悄悄地影響著我國50歲以上男性的生活質量和預期壽命，成為泌尿外科領域一個越來越重要的課題。
　

2、　 PCa區(qū)別于其它腫瘤的一個顯著特點是：生物學行為高度異質性且無法準確預測。有些PCa在1～2年內迅速進展：有些卻可終生未被發(fā)現(xiàn)，不威脅生命。PCa另一顯著特點是在PCa的早期階段，前列腺癌的進展依賴于雄激素。目前對早期局限性的PCa多采用前列腺癌根治術或根治性放療以期達到治愈的目的，對于進展期的PCa則主要采用手術或藥物去勢的雄激素剝奪的治療方法，初期可以取得較為滿意的效果，但是經(jīng)過12～18個月的抗雄治療后PCa將不可避免地從激

3、素依賴性轉變?yōu)榧に胤且蕾囆郧傲邢侔罱K導致患者死亡。目前認為PCa的發(fā)生、發(fā)展是一個涉及多因素、多步驟的異常復雜的過程，不僅與遺傳因素有關，還受年齡、種族、飲食習慣、環(huán)境等因素的影響。到目前為止，還有很多和PCa的發(fā)生、發(fā)展相關的機制尚未闡明。
　　 MAZ(Myc-associatedZinc-fingerprotein)基因位于人染色體16p11.2，基因轉錄產物為2.7kb的mRNA，編碼477個氨基酸、分子量為60kd

4、的MAZ蛋白。MAZ基因在人的心臟、腦、肺、肝、骨骼肌、胰腺和前列腺組織中均有表達，已有的研究結果表明，MAZ基因的異常表達與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展密切相關。MAZ蛋白對一些基因的啟動轉錄具有重要的調節(jié)作用，如C-MYC、RAG-2、5-羥色胺1α受體、ENT-1、CLC-K1、phenylethanolamineN-methyltransferase(PNMT)和PPAR-γ1等，同時MAZ蛋白對某些基因的終止轉錄也發(fā)揮著重要作用，如end

5、othelialnitric-oxidesynthase(eNOS)、Sp4、端粒酶等。因此MAZ是在啟動靶基因轉錄和終止基因轉錄的過程中發(fā)揮著雙重作用的轉錄因子。
　　 目前MAZ基因在PCa發(fā)生、發(fā)展及由激素敏感性PCa向非敏感性癌轉化的過程中的表達及其作用機理研究尚未見專題報道，因此有必要通過研究MAZ基因對前列腺癌細胞生物學行為的影響，闡明MAZ在前列腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用機制，進一步探索PCa發(fā)生和發(fā)展的分子機制，為尋

6、找新的PCa基因治療靶點和新的PCa預測因子提供實驗依據(jù)。
　　 目的：
　　 探討MAZ在PCa發(fā)生、發(fā)展及由激素敏感性向非敏感性轉化中的表達及作用機理、MAZ和雄激素受體之間相互作用的關系，探索PCa發(fā)生和發(fā)展的分子機制，為尋找新的PCa基因治療靶點、尋找新的PCa預后因子提供實驗依據(jù)。
　　 研究方法：
　　 1、用QPCR方法檢測MAZ在15對激素依賴性前列腺癌組織和癌旁組織中表達的差異。用免疫組

7、化方法檢測MAZ在40例激素依賴性PCa、10例激素非依賴PCa、10例前列腺增生和8例PIN石蠟切片中表達的差異。
　　 2、應用quantitativeRT-PCR技術檢測5株前列腺癌細胞系和2株正常前列腺細胞系中MAZmRNA表達量，從中篩選出表達量高的細胞株，用小RNA干擾技術干擾MAZ基因的表達，通過觀察和分析前列腺癌細胞株在增殖、凋亡、細胞周期、平板克隆形成、侵襲和遷移能力方面的變化，研究MAZ對前列腺癌細胞株生物學

8、行為的影響。
　　 3、采用quantitativeRT-PCR的實驗方法對人前列腺癌組織、癌旁組織中MAZ、AR的表達進行檢測，以明確MAZ和AR兩者表達量之間的關系。通過干擾LNCaP-AD細胞中AR基因的表達，用quantitativeRT-PCR、Westernblot檢測MAZ表達變化，同時用小RNA干擾技術干擾LNCaP-AD細胞中MAZ基因的表達，檢測AR表達變化，以探討MAZ基因在前列腺癌發(fā)生、發(fā)展過程中是否和A

9、R基因相關。
　　 結果：
　　 1、MAZ在15對ADPC組織和癌旁組織中的表達存在差異，在ADPC中表達較高(P＜0.05)。免疫組化染色后經(jīng)過病理學半定量免疫組化評分發(fā)現(xiàn)MAZ在PIN中的表達較高，有些達到強陽性，明顯高于BPH組織(P=0.0115)，MAZ在ADPC三組內部比較(Gleason評分＜7、=7、＞7)及三個樣本間兩兩比較均無統(tǒng)計學差異，而在ADPC和AIPC比較則有統(tǒng)計學差異(P=0.0406)，

10、MAZ在ADPC中的表達高于AIPC組織。
　　 2、用QPCR方法檢測在了上述5株前列腺癌細胞系和2株正常前列腺細胞系中MAZmRNA表達量，結果示MAZmRNA在有AR表達的LNCaP-AD細胞和C4-2細胞中的相對表達量較高，而在高度轉移潛能且無AR表達的PC3細胞系中表達最低。用RNA干擾技術轉染干擾MAZ基因的715siRNA后LNCaP-AD細胞的遷移和侵襲能力明顯減弱，LNCaP-AD的增殖明顯受到抑制，克隆形成率

11、也明顯降低，和對照的NC組和MOCK組比較有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，轉染715siRNA組的的凋亡率高于轉染NC組和MOCK組(P＜0.05)。細胞周期檢測實驗中，轉染siRNA715組LNCaP-AD細胞處于S期的細胞數(shù)與轉染NC組和MOCK組比較明顯減少(P＜0.05)，細胞被阻滯于G0-G1期。
　　 3、采用quantitativeRT-PCR的實驗方法對15對人前列腺癌組織、癌旁組織中MAZ、AR的表達進行檢測，結

12、果兩者的表達量呈正相關。通過干擾LNCaP-AD細胞中AR基因的表達，用quantitativeRT-PCR、Westernblot檢測MAZ表達，發(fā)現(xiàn)MAZ基因表達下調，和對照的NC組和MOCK組比較有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。用小RNA干擾技術干擾LNCaP-AD細胞中MAZ基因的表達，檢測AR表達，發(fā)現(xiàn)AR基因表達上調，和對照的NC組和MOCK組比較有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。
　　 結論：
　　 MAZ在前列