2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩112頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、戊型肝炎病毒(HEV)為無包膜正二十面體單鏈正義RNA病毒,主要經(jīng)糞口途徑傳播,往往在發(fā)展中國家造成爆發(fā)流行,在發(fā)達國家導(dǎo)致散發(fā)流行。戊型肝炎的病死率為0.2-4%,孕婦病死率則高達10-20%,且越來越多的證據(jù)表明其可能是一種人獸共患病,給人類身體健康造成極大的危害。HEV由于一直缺乏穩(wěn)定有效的細胞感染模型,其感染入胞機制及其致病機理至今仍不清楚。本論文利用能較好模擬HEV表面結(jié)構(gòu)的HEV衣殼蛋白片段p239為模型,構(gòu)建p239相互作

2、用蛋白篩選平臺,篩選可能參與HEV入胞過程的宿主細胞蛋白,為揭示HEV感染入胞機制提供線索。 p239為HEV pORF2(aa368-606)片段,原核表達能自組裝成15-30nm的蛋白顆粒,與戊型肝炎患者急性期血清反應(yīng)性良好,免疫恒河猴可以完全預(yù)防HEV導(dǎo)致的戊型肝炎。p239孵育HepG2細胞,能特異性的吸附并侵入細胞,且被p239中和單抗8C11阻斷。p239與野生1型HEV共孵育細胞,能阻斷HEV感染HepG2和人原代

3、肝細胞,表明p239能較好模擬HEV表面結(jié)構(gòu)。 利用p239較好模擬HEV表面結(jié)構(gòu)的特性,將其作為蛋白親合層析的配體/誘餌蛋白,借助鈣調(diào)蛋白結(jié)合肽(Calmodulin binding peptide,CBP)與鈣調(diào)蛋白的特異性結(jié)合將其固定于瓊脂糖固相介質(zhì),親合層析體外篩選HepG2細胞、猴肝組織中與其相互作用的蛋白,獲得的候選蛋白樣品采用二維電泳進行分離,挖取特異的候選蛋白點,膠內(nèi)原位酶切,MALDI-TOF-MS分析鑒定,確

4、定六個候選蛋白:Grp78、HSP90、α-tubulin、p43、ATPase beta subunit、unamed orotein。免疫共沉淀初步確定p239與Grp78、HSP90、α-tubulin之間的特異性相互作用。 有研究發(fā)現(xiàn)Grp78分布于細胞膜表面參與柯薩奇病毒、登革熱病毒的入胞。為了進一步研究p239與Grp78的相互作用,原核表達、純化p239、Grp78,免疫共沉淀實驗發(fā)現(xiàn)二者之間的特異性相互作用為直接

5、結(jié)合,且原核表達純化的Grp78-his pnll down實驗進一步佐證了二者的直接相互作用,還發(fā)現(xiàn)ATP可以解離二者的結(jié)合,這一系列證據(jù)充分說明二者的結(jié)合是直接的、可逆的生理性結(jié)合。將p239的C端缺失6個氨基酸得到p233,p233并不與Grp78結(jié)合,表明p239通過構(gòu)象位點與Grp78結(jié)合。中和抗體8C11阻斷結(jié)合實驗發(fā)現(xiàn)二者的結(jié)合位點與p239的主要免疫優(yōu)勢表位8C11存在區(qū)域重疊。流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)Grp78同樣存在于He

6、pG2細胞表面;激光共聚焦顯微鏡發(fā)現(xiàn)p239與HepG2細胞膜表面的Grp78存在部分共定位;且原核表達純化的Grp78、Grp78-his以及抗Grp78鼠多抗血清都能部分阻斷p239對宿主細胞的吸附。 綜上所述,我們得出以下結(jié)論: 1.p239可以吸附并侵入宿主細胞,這種吸附可以被8C11特異性阻斷:且p239競爭性抑制HEV對HepG2及人原代肝細胞的感染,表明p239較好的模擬HEV表面結(jié)構(gòu),可以作為HEV模型用

7、于病毒與宿主細胞相互作用研究。 2.以p239-CBP為誘餌蛋白篩選宿主細胞中的相互作用蛋白,獲得Grp78、HSP90、α-tubulin、p43、ATPase beta subunit、unamed protein六個候選蛋白,免疫共沉淀初步確定p239與Grp78、HSP90、α-tubulin之間的特異性相互作用,表明以p239為靶蛋白的相互作用蛋白篩選平臺具有可行性。 3.原核表達純化的Grp78、Grp78-

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論