烏苯美司對腎癌細胞體外生長的影響及機制的研究.pdf

1、目的：研究烏苯美司對腎癌細胞株786-0和OS-RC-2體外生長的影響，初步研究其對腎癌細胞作用的機制。
　　方法：1.以腎癌細胞株786-0及OS-RC-2為研究對象研究烏苯美司對腎癌細胞體外生長的影響:WST-8細胞增殖實驗及細胞生長曲線繪制檢測烏苯美司對腎癌細胞株786-0細胞及OS-RC-2細胞增殖能力的影響;細胞劃痕實驗觀察烏苯美司對腎癌細胞株786-0細胞及OS-RC-2細胞遷移能力的影響;Transwell細胞侵襲實

2、驗觀察烏苯美司對腎癌細胞株786-0細胞及OS-RC-2細胞侵襲能力的影響。
　　2.烏苯美司對腎癌細胞株786-0和OS-RC-2作用機制的初步研究:L-亮氨酸-P硝基苯胺底物法檢測烏苯美司對腎癌細胞株786-0細胞及OS-RC-2細胞氨肽酶活性的影響。Western Blot檢測烏苯美司作用于腎癌細胞株786-0細胞及OS-RC-2細胞后，兩種細胞CD13、LC-3、Caspase-3的表達水平。以不同濃度的烏苯美司、自噬誘導(dǎo)

3、劑rapamycin、自噬抑制劑3-Methyladenine作用于腎癌細胞株786-0和OS-RC-2，LDH釋放試驗檢測作用后細胞的死亡率。
　　3.以腎癌患者手術(shù)取得病理組織為研究對象:Western Blot檢測氨肽酶N/CD13和LC-3在腎癌組織和癌旁正常組織的表達量;以腎癌患者及腎良性病變患者手術(shù)取得病理組織構(gòu)建腎臟病變的組織芯片，通過免疫組化染色觀察烏苯美司的作用靶點氨肽酶N/CD13在腎癌組織及正常組織中的表達情

4、況。
　　結(jié)果：WST-8細胞增殖檢測及細胞生長曲線顯示經(jīng)0.1mg/ml烏苯美司作用后，腎癌細胞株786-0及OS-RC-2增殖均受到明顯抑制(P＜0.05)，且隨著藥物濃度的增加，這種抑制作用也逐漸增強（P＜0.05）。細胞遷移實驗結(jié)果表明0.5mg/ml烏苯美司作用12小時對腎癌細胞株786-0及OS-RC-2細胞的遷移有明顯的抑制作用(P＜0.05)，且隨著烏苯美司藥物濃度增加，抑制作用也隨之增強(P＜0.05)。Tran

5、swell細胞侵襲實驗結(jié)果顯示0.5mg/ml烏苯美司作用24小時能明顯抑制786-0及OS-RC-2細胞的侵襲(P＜0.05)。氨肽酶活性檢測試驗證實經(jīng)0.25mg/ml烏苯美司作用24小時后，腎癌細胞株786-0及OS-RC-2細胞的氨肽酶活性都明顯降低活性(P＜0.05)。Western Blot結(jié)果顯示最高濃度為0.5mg/ml烏苯美司作用于腎癌細胞株786-0及OS-RC-2后，并沒有降低兩種細胞氨肽酶N/CD13蛋白的表達量

6、(P＞0.05);兩種腎癌細胞株的自噬相關(guān)蛋白LC-3B表達量明顯升高(P＜0.05)，且這種效應(yīng)可被自噬誘導(dǎo)劑Rapamycin增強或被自噬抑制劑3-MA阻斷(P＜0.05)。對手術(shù)病理組織的Western Blot檢測結(jié)果顯示氨肽酶N/CD13和LC-3在腎癌組織及癌旁正常組織中均有表達，且2種蛋白在癌旁正常組織中的表達量均明顯高于癌組織（P＜0.05）。腎臟組織芯片免疫組化染色顯示氨肽酶N/CD13在各種病理類型的腎臟病變中均有表