rna干擾kr252;ppel樣轉(zhuǎn)錄因子8對腎癌7860細(xì)胞體內(nèi)外生長的影響

1、R N A 干擾 K r位 pP e l樣 轉(zhuǎn) 錄 因子 8 對 腎癌786一 0 細(xì) 胞 體 內(nèi)外 生長 的影 響R N Ain te r fe r e n c in gK r 位 P P e llik efa c to r8in h ib itsth er e n a lc a rc in o m a7 8 6 一 0c ellsg ro w thinv itr oa n dI nV IV O姓 名 : 付 偉 金指 導(dǎo) 教 師 :

2、導(dǎo) 師 小 組 成 員 :丁強(qiáng)教 授夏 國偉 教 授方 祖 軍 副 教 授200 9 年 4 月 10 日復(fù)旦大學(xué)博士研究生畢業(yè)論文 中文摘要朋A 干擾 Kru ppel 樣轉(zhuǎn)錄 因子 8 對 腎癌 786一 0 細(xì)胞體 內(nèi)外生長 的影 響中文摘要腎細(xì) 胞 癌 (ren alCel lca rCino ma ， RCC )是泌尿 系統(tǒng) 的常 見腫 瘤 ， 占全 部 成 人 腫 瘤發(fā)病 率 的 2% 。根 治性 腎癌 切 除術(shù) (radi

3、Calnephre Ctomy， RN )是 治療 局 限性 腎細(xì) 胞癌 最有 效 的方法 ， 由于缺 乏 早 期診 斷及 對 晚 期 患者 的有 效 治療 ，此類 患者 仍 保 持著 較 高 的死 亡 率 。25% 的 腎細(xì) 胞 癌 患者 確 診 時 已處 于 局 部進(jìn) 展 期 或 發(fā) 生轉(zhuǎn) 移 。放 、化 療 對 晚 期腎細(xì) 胞 癌 治 療 效 果 不 佳 ，5 年 生 存 率 僅 為 5階 10% 。 白介 素 (int erl

4、euk in) 和 干 擾 素(interferon) 單 一或 聯(lián) 合 免疫 治療 由于毒性 大 ，臨床 使用 上 受 到 限制 ，而 且 免 疫 治療總緩 解 率 不 高 。因此 了解 腎細(xì) 胞癌 轉(zhuǎn) 移和 進(jìn) 展 的分 子機(jī) 制 對 于提 高早 期 診 斷和 患者 生存 率 的治療 十 分 重 要 。Kruppel 樣 轉(zhuǎn) 錄 因子 8 (Kruppel一 1ikefaet。 r s ， KLFS)是 Kruppel 樣 轉(zhuǎn) 錄

5、因子 家族 成 員之 一 。KLFS 在 惡性 腫 瘤 中呈 高表達(dá) ， 正常組 織 中低 表 達(dá) 。相 關(guān)研 究表 明 KLFS 通過 激 活 細(xì) 胞 周 期 蛋 白 D1 (cyClin DI ) 的 啟 動 子 ， 在 粘 著 斑 激 酶 (foc alad hesionkinase， FAK )調(diào)控 細(xì) 胞 周期 、細(xì)胞 致癌 性轉(zhuǎn) 化 、侵 襲 力 、上皮 間質(zhì) 轉(zhuǎn) 型 (即 ithelial tomesenChyma ltr

6、ansition， EMT)方 面 發(fā)揮 重 要 作 用 。但 KLFS 在 腎細(xì) 胞 癌 的發(fā) 生 、發(fā) 展 、侵 襲 方 面 所 起 的作 用 尚不 清 楚 。本 課 題 首 先 應(yīng) 用 逆 轉(zhuǎn) 錄 一 聚 合 酶 鏈 反 應(yīng) (reversetranscr ipt ion一 pO lymeraseChai nreaction ，RT一 PCR) 和 免疫 組織 化 學(xué)方法 檢 測 42 例 散 發(fā)性 腎細(xì) 胞 癌 患者 的 KLF

7、S基 因和 蛋 白質(zhì) 的表 達(dá) 情 況 ，初 步探 討 了 KLFS 基 因與 腎細(xì)胞 癌 發(fā) 生 、發(fā)展 的可 能相 關(guān)性 。接 下 來 將 構(gòu) 建 的經(jīng)化 學(xué)修 飾 的小干擾 RNA (Sma l1interfereneeRNA，siRNA)轉(zhuǎn) 染到表 達(dá) KLFS 基 因 的 腎癌 786一 0 細(xì) 胞 中 。明確 KLFS一 SIRNA 在 基 因和 蛋 白水平 能夠 有 效抑 制 KLFS 的表 達(dá) 。并研 究干擾 KLFS

8、基 因后 對 細(xì) 胞 生長 、細(xì) 胞侵 襲 力 、細(xì) 胞 凋 亡 和 細(xì)胞 周 期 ，對 FAK 、cyClinD I、鈣 粘 蛋 白 (E一 ca dher in) 基 因和 蛋 白表 達(dá) 的影 響 。然 后接種 腎癌 786一 0 細(xì) 胞 形 成裸 鼠移 植瘤 模 型后 ，探 討 RNA 干擾 KLFS 基 因后 對 裸 鼠致 瘤 性及 腎移 植瘤 內(nèi) KLFS 基 因和 蛋 白表 達(dá) 的影 響 。本課 題采 用 RNA 干擾 方

9、法研 究 KLFS 基 因?qū)?腎癌 786一 0 細(xì) 胞 增 殖 和 腫瘤 生長 的影 響 ， 為 腎癌 的基 因治療 提 供 了一 定 的實驗 依據(jù) 。第 一部分KLFS 在 腎癌 組織 中的表達(dá)及 臨床 意義目的 :探 討 Kru ppel 樣 轉(zhuǎn) 錄 因子 8 (KLFS) 在 腎透 明細(xì) 胞 癌 的表 達(dá) 及 其 臨床 意 義 。方 法 :應(yīng) 用 RT一 PCR 和 免疫 組織 化 學(xué) 方 法 從基 因和 蛋 白水 平 檢 測