β-catenin對K562細(xì)胞體內(nèi)成瘤能力及對原代CML干祖細(xì)胞體內(nèi)外生物學(xué)功能影響的初步研究.pdf

1、近些年來研究發(fā)現(xiàn)Wnt/β-catenin在多種實體腫瘤及血液腫瘤中存在異常激活狀態(tài)并在腫瘤的發(fā)生、維持等方面起著一些重要的作用；β-catenin的異常積累增高是其中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。慢粒急變中，β-catenin水平增高是粒巨祖細(xì)胞(GMP)發(fā)生白血病干細(xì)胞(LSC)轉(zhuǎn)化的重要機制。在慢粒由慢性期進展為加速/急變期的過程中，常發(fā)現(xiàn)β-catenin表達水平增高。然而目前β-catenin在慢粒疾病進展中的確切作用尚未闡明。基于這些研究背景

2、，本論文設(shè)計在先前的工作基礎(chǔ)上，以β-catenin為靶點，特異性上調(diào)或下調(diào)β-catenin表達水平后，觀察CML細(xì)胞生物學(xué)功能的改變，以期為進一步研究揭示慢粒急變機制提供一些線索，同時也為慢粒進展期的治療尋找一些可能途徑。 本論文實驗工作分為兩部分： 一、延續(xù)本實驗室前期的體外研究工作，特異性干擾β-catenin后，觀察K562細(xì)胞體內(nèi)成瘤能力的變化。裸鼠皮下成瘤實驗證實干擾后K562細(xì)胞成瘤能力明顯受抑：①成瘤率

3、：未干擾組(n=9)、對照組(無關(guān)序列干擾)(n=8)和干擾組(β-catenin特異性干擾)(n=9)成瘤率分別為100％、87.5％和0，干擾組成瘤率與前兩組有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.001)；②成瘤曲線：前兩組均成瘤，最終瘤塊體積無統(tǒng)計學(xué)差異，但未干擾組瘤塊體積增長略快；干擾組未見成瘤。 二、上調(diào)/下調(diào)β-catenin水平，觀察對原代CML干祖細(xì)胞(CD34+細(xì)胞)細(xì)胞生物功能的影響。①采用Nucleofection方

4、法轉(zhuǎn)染原代CML干祖細(xì)胞，轉(zhuǎn)染率可達70％。用功能質(zhì)粒轉(zhuǎn)染慢性期干祖細(xì)胞，β-catenin表達水平增高倍數(shù)為6.10±2.99(Range：3.52～12.19)(與轉(zhuǎn)染前比較，P=0.005)。用干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染急變期干祖細(xì)胞，β-catenin表達水平下降倍數(shù)為8.79±3.05(Range：5.77～13.29)(與轉(zhuǎn)染前比較，P=0.043)。②β-catenin功能質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CML-CP干祖細(xì)胞后，細(xì)胞生長、增殖能力較對照組增加。

5、③β-catenin干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CML-BC干祖細(xì)胞后，細(xì)胞生長、增殖能力受抑。④CP、BC干祖細(xì)胞干擾前后，BCR-ABL轉(zhuǎn)錄本水平無明顯變化。 綜合以上實驗工作，初步認(rèn)為：①特異性干擾下調(diào)β-catenin的表達，影響K562細(xì)胞體外生長增殖能力，抑制其體內(nèi)成瘤。②Nucleofection功能序列或特異性干擾片斷是上調(diào)或下調(diào)原代CML干祖細(xì)胞β-catenin表達水平的有效方法。③CML-CP干祖細(xì)胞β-catenin表達