下調(diào)PMS2基因后A2780細(xì)胞體外生物學(xué)功能的研究.pdf

1、目的：
　　建立錯(cuò)配修復(fù)基因PMS2表達(dá)下調(diào)的卵巢癌A2780細(xì)胞株,體外研究該腫瘤細(xì)胞遷移、增殖及凋亡的變化。
　　方法：
　　選取卵巢癌A2780細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng),用siRNA下調(diào)PMS2的表達(dá)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)轉(zhuǎn)染48h后PMS2mRNA的相對(duì)表達(dá)水平。免疫印跡法檢測(cè)轉(zhuǎn)染72h后PMS2蛋白的相對(duì)表達(dá)水平。Transwell遷移實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)研究PMS2表達(dá)下調(diào)后腫瘤細(xì)胞遷移能力的改變。臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測(cè)PM

2、S2表達(dá)下調(diào)后,腫瘤細(xì)胞增殖能力的變化。流式細(xì)胞術(shù)(FACS)分析PMS2表達(dá)下調(diào)對(duì)癌細(xì)胞凋亡的影響。
　　結(jié)果：
　　1.siRNA可下調(diào)A2780細(xì)胞的PMS2表達(dá)
　　(1)RT-PCR法檢測(cè)出轉(zhuǎn)染siRNA后PMS2mRNA的相對(duì)表達(dá)量明顯下降。同空白組相比,轉(zhuǎn)染PMS2-homo-124,PMS2-homo-2190,PMS2-homo-236的mRNA相對(duì)表達(dá)量降低,其相對(duì)表達(dá)水平分別為(4.17±0.51

3、)％,(0.14±0.15)%,(10.67±4.30)%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。我們選擇轉(zhuǎn)染效率較高的質(zhì)粒PMS2-homo-124,PMS2-homo-2190進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
　　(2)免疫印跡法證明轉(zhuǎn)染后PMS2蛋白的相對(duì)表達(dá)量明顯下降。轉(zhuǎn)染72h后,PMS2-homo-124,PMS2-homo-2190的蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為(0.73±0.47)、(2.19±0.42),明顯低于空白組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

4、<0.05)。
　　2.PMS2表達(dá)下調(diào)后細(xì)胞遷移增加。Transwell遷移實(shí)驗(yàn)可見:穿膜細(xì)胞PMS2-homo-124組(105.3±8.41)和PMS2-homo-2190組(126.62±34.59)比NC組(51.25±15.41)和空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組(48.30±6.77)數(shù)量多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。劃痕實(shí)驗(yàn)也可見:PMS2表達(dá)下調(diào)細(xì)胞遷移明顯比NC組及空白組多。
　　3.PMS2表達(dá)下調(diào)后細(xì)胞增殖能力增

5、強(qiáng)。臺(tái)盼藍(lán)拒染法證明:轉(zhuǎn)染48h后PMS2表達(dá)下調(diào)細(xì)胞增殖活力比NC組及空白組高。
　　4.PMS2表達(dá)下調(diào)后細(xì)胞凋亡率無明顯變化。轉(zhuǎn)染PMS2-homo-124和PMS2-homo-2190后癌細(xì)胞總凋亡率分別為(6.47±2.73)%和(5.47±2.13)%與NC組(5.9±1.8)%及空白組(5.33±2.57)%相比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),早期凋亡率也無明顯差異(P>0.05)。
　　結(jié)論：