表皮細(xì)胞體外擴(kuò)增規(guī)律與體內(nèi)成表皮能力的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、為了更好地為組織工程皮膚臨床應(yīng)用提供參考與指導(dǎo),我們研究了表皮細(xì)胞的體外擴(kuò)增以及擴(kuò)增規(guī)律后細(xì)胞的體內(nèi)表皮形成的能力.目的:首先單獨(dú)研究表皮細(xì)胞的體外擴(kuò)增規(guī)律,同時(shí)比較不同年齡人群的表皮細(xì)胞擴(kuò)增規(guī)律;其次,進(jìn)一步探索其擴(kuò)增機(jī)制;最后,研究表皮干細(xì)胞在表皮組織形成與維持過(guò)程中所起的作用.通過(guò)上述研究,來(lái)闡述表皮細(xì)胞體外擴(kuò)增與體內(nèi)表皮形成的規(guī)律.從而更好地為組織工程皮膚臨床應(yīng)用提供參考與指導(dǎo).方法:1.通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞平均直徑測(cè)量、克隆染色

2、,觀察不同代次細(xì)胞生長(zhǎng)規(guī)律,比較不同年齡人群的表皮細(xì)胞的生長(zhǎng)規(guī)律.2.通過(guò)RT-PCR、流式細(xì)胞技術(shù),免疫熒光染色分析干細(xì)胞表型細(xì)胞在各代中的動(dòng)態(tài)變化.3.借助RT-PCR、流式細(xì)胞儀分析等細(xì)胞表型檢測(cè)技術(shù),比較不同年齡人群原代表皮細(xì)胞中干細(xì)胞表型體外擴(kuò)增能力.4.選取包含干細(xì)胞表型的已擴(kuò)增細(xì)胞,與藻酸鈣均勻混合后,移植于裸鼠全層皮膚缺損處,同時(shí)與不包含干細(xì)胞表型的已擴(kuò)增細(xì)胞及不含細(xì)胞的空白材料進(jìn)行對(duì)照,對(duì)各組裸鼠連續(xù)腹腔注射2周Brd

3、-U,動(dòng)態(tài)觀察三個(gè)實(shí)驗(yàn)組的體內(nèi)表皮形成與維持情況,觀察表皮細(xì)胞移植1個(gè)月后的Brd-U細(xì)胞滯留情況.結(jié)論:人表皮細(xì)胞體外擴(kuò)增能力的維持需要有干細(xì)胞表型細(xì)胞的存在.不同年齡人原代表皮細(xì)胞干細(xì)胞表型無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,是其擴(kuò)增能力無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的內(nèi)在原因.是否包含表皮干細(xì)胞,對(duì)復(fù)層表皮組織形成與短期存在無(wú)影響,但只有移植的表皮細(xì)胞中包含干細(xì)胞,所形成的復(fù)層表皮才能長(zhǎng)期存在.經(jīng)過(guò)體外擴(kuò)增的表皮細(xì)胞中的干細(xì)胞與體內(nèi)干細(xì)胞,在維持組織與自我更新能力方面沒