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1、該項研究側(cè)重于探索和建立人表皮干細胞的體外分離和體外培養(yǎng)體系的方法,使得運用表皮干細胞體外構(gòu)建皮膚成為可能,也為進一步研究人表皮干細胞的機制搭建一個研究的平臺.材料和方法:以小兒包皮作為分離培養(yǎng)表皮干細胞的皮膚來源,應(yīng)用Dispase II分離酶消化法獲得小兒表皮,并制成單表皮細胞懸液,再采用表皮干細胞條件培養(yǎng)液培養(yǎng)法置于37℃5﹪CO<,2>培養(yǎng)箱中培養(yǎng),從而分離培養(yǎng)出表皮干細胞.表皮干細胞條件培養(yǎng)液中含有適量的表皮細胞生長因子(EG
2、F),是通過在表皮細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)液中加入不同濃度的EGF,根據(jù)細胞的生長情況,篩選出合適的EGF濃度.此外,還探索了傳代培養(yǎng)所用消化酶的濃度和消化時間.最后觀察所得細胞是否呈克隆狀生長,并采用免疫組化染色法檢測β<,1>整合素和角蛋白19的表達水平.結(jié)論:采用0.375﹪的Dispase II酶分離出小兒包皮的表皮,用0.05﹪胰蛋白酶將表皮分離成單個細胞,選用含15ng/ml EGF的無血清SFM培養(yǎng)液作為表皮干細胞的條件培養(yǎng)液,置于3
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