人胎兒表皮干細胞的分離培養(yǎng)、基因轉染及向毛囊的定向分化.pdf

1、研究目的:該課題的研究目的是利用毛乳頭細胞誘導表皮干細胞分化為毛囊,利用胎兒皮膚細胞為種子細胞構建組織工程皮膚以最大限度地降低免疫原性,同時嘗試將外源基因轉染至表皮干細胞,為表皮干細胞應用于基因治療提供初步的實驗依據(jù).研究結論:1.人胎兒表皮干細胞在人胎兒真皮毛乳頭細胞的誘導下可定向分化為毛囊,真皮成纖維細胞不具備誘導毛囊的功能.2.人胎兒表皮干細胞膜片為表皮層,接種人胎兒毛乳頭細胞的膠原纖維凝膠為真皮層構建的組織工程皮膚可有效修復裸鼠

2、全層皮膚缺損.3.Ⅳ型膠原快速粘附法可有效分離和富集人胎兒表皮干細胞,以人胎兒成纖維細胞條件培養(yǎng)液配制的干細胞培養(yǎng)液可有效維持人胎兒表皮干細胞體外增殖和未分化狀態(tài).4.人胎兒表皮干細胞可被脂質(zhì)體介導的p cDNA3.1-VEGF165轉染,可被重組腺相關病毒介導的綠色熒光蛋白基因轉染,但如何維持目的基因的長期表達仍有待研究.5.機械分離+膠原酶消化法分離毛乳頭,角質(zhì)形成細胞條件培養(yǎng)液培養(yǎng)毛乳頭細胞,是體外分離培養(yǎng)毛乳頭細胞的高效、簡便、

3、經(jīng)濟、可重復性強的方法.創(chuàng)新點:1.以人胎兒毛乳頭細胞誘導人胎兒表皮干細胞分化為毛囊.2.以脂質(zhì)體為載體介導外源的VEGF1 6 5基因轉染人胎兒表皮干細胞,以腺相關病毒為載體介導外源的GFP基因轉染人胎兒表皮干細胞,為人胎兒表皮干細胞用作基因治療的靶細胞提供初步的實驗依據(jù).3.器械分離結合膠原酶消化法,較傳統(tǒng)的顯微器械分離法,分離毛乳頭的效率提高了1 0倍以上,且毛乳頭細胞貼壁快,縮短了原代培養(yǎng)的時間.采用角質(zhì)細胞條件培養(yǎng)液,增加了毛