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文檔簡(jiǎn)介
1、本研究包括二部分:
第一部分:放射線與恩度不同聯(lián)合模式對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2細(xì)胞 VEGF表達(dá)及放射敏感性的影響
目的:探討放射線聯(lián)合恩度(Endostar)的不同模式對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2中VEGF表達(dá)及放射敏感性的作用。
方法:1. MTT法檢測(cè)不同濃度(5-640 μg/ml)Endostar 作用24小時(shí)后對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2 生長(zhǎng)的影響;2.照射聯(lián)合Endostar 作用
2、于人鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2的方案共分為6組:?jiǎn)斡肊ndostar(E組)、單純照射(R組)、使用Endostar 4小時(shí)后照射(E4R組)、使用Endostar 24小時(shí)后照射(E24R組)、先照射隔4小時(shí)后使用Endostar(R4E)、先照射隔24小時(shí)后使用Endostar(R24E),RT-PCR和Western blot檢測(cè)各組VEGF的表達(dá);3. 克隆形成試驗(yàn):不同濃度Endostar(0、25、125μg/ml)作用于人鼻咽
3、癌細(xì)胞株CNE-2,各濃度組分別給與不同劑量鈷-6o 照射,經(jīng)多靶單擊模型擬合細(xì)胞存活曲線,獲得不同處理組的放射增敏比。
結(jié)果:1. Endostar對(duì)CNE-2細(xì)胞的IC50為(3.01±0.12)mg/ml;2. 當(dāng)照射劑量為1-5Gy,單純照射使CNE-2中VEGF表達(dá)水平隨放射劑量增高而降低(P<0.05);當(dāng)照射劑量為2 Gy時(shí),照射聯(lián)合恩度的各處理組(E4R、E24R、R4E和R24E組)均較單純照射組能更大程
4、度的下調(diào)VEGF mRNA和蛋白表達(dá)水平(P<0.05),在Endostar 濃度為80 μg/ml時(shí),E24R組較其余各組能最大程度的抑制VEGF mRNA和蛋白表達(dá)(P<0.05);E4R、E24R、R4E和R24E組中VEGF表達(dá)水平僅在Endostar 為5μg/ml、20 μg/ml和80 μg/ml時(shí)隨藥物濃度增高而降低,在Endostar 濃度為125μg/ml和200 μg/ml時(shí),VEGF表達(dá)水平隨藥物濃度增高而增高;
5、3. Endostar 為25μg/ml和125μg/ml時(shí),放射增敏比分別為1.28和1.43。
結(jié)論:放射線聯(lián)合Endostar 較單純照射和單純用藥可以更大程度的抑制CNE-2細(xì)胞VEGF表達(dá);當(dāng)Endostar 為80 μg/ml,E24R組較其余各組能最大程度的抑制VEGF表達(dá);Endostar對(duì)CNE-2細(xì)胞有放射增敏作用。
第二部分:放射治療與恩度不同聯(lián)合模式對(duì)鼻咽癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)及腫瘤放射敏感
6、性的影響
目的:通過(guò)構(gòu)建人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,研究放射治療聯(lián)合恩度的不同模式對(duì)鼻咽癌移植瘤生長(zhǎng)的抑制作用及對(duì)腫瘤放射敏感性的影響。
方法:構(gòu)建人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,按隨機(jī)數(shù)字表法將其分為7組,分別給予瘤內(nèi)注射生理鹽水(對(duì)照組)、5mg/kg 恩度(E1組)、10mg/kg 恩度(E2組)、50mg/kg 恩度(E3組)、10 Gy 放射線照射(R組)、10 Gy 放射線照射后注射50mg/kg恩度(R+E
7、組)、注射50mg/kg 恩度2 天后予10 Gy 放射線照射(E+R組),恩度均為連續(xù)瘤內(nèi)注射14 天。分時(shí)段測(cè)量腫瘤體積,注射后1周處死動(dòng)物,切除腫瘤,免疫組化檢測(cè)腫瘤組織微血管密度(MVD)、VEGF和HIF-1a表達(dá),免疫熒光雙標(biāo)檢測(cè)腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。
結(jié)果:成功構(gòu)建人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型。瘤內(nèi)連續(xù)注射恩度對(duì)鼻咽癌移植瘤生長(zhǎng)有抑制作用,且表現(xiàn)為劑量依賴(lài)性,治療第22 天E3組的腫瘤平均體積(4.11±0.16c
8、m 3)較對(duì)照組(7.01±0.32 cm 3)有較大程度抑制(P<0.05);恩度對(duì)鼻咽癌移植瘤有放射增敏作用,E+R組的腫瘤生長(zhǎng)延遲時(shí)間(10.5±1.0天)明顯長(zhǎng)于R+E組(6.5±0.8 天)、R組(3.8±0.5天)和E3組(2.5±0.2 天),P<0.05;單純瘤內(nèi)注射恩度能導(dǎo)致腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡,且呈劑量依賴(lài)性,放射治療聯(lián)合恩度能促進(jìn)各單純治療組的致腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡作用;E+R組的平均MVD 較對(duì)照組平均MVD 下
9、降了87[%],下降程度明顯高于E3組(32[%])和R組(41[%]),P<0.05;免疫組化半定量分析得出,單純恩度組(E1-E3組)能下調(diào)移植瘤組織中VEGF和HIF-1a表達(dá),且呈劑量依賴(lài)性,E+R組和R+E組對(duì)VEGF和HIF-1a表達(dá)的抑制作用均大于對(duì)照組、E3組和R組。
結(jié)論:瘤內(nèi)注射恩度能抑制人鼻咽癌裸鼠移植瘤的生長(zhǎng);恩度對(duì)鼻咽癌移植瘤有放射增敏作用;恩度可以導(dǎo)致腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡,放射治療聯(lián)合恩度能促進(jìn)
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