調(diào)控RAC1-NADPH信號(hào)通路對(duì)不同分化類型鼻咽癌細(xì)胞的放射敏感性研究.pdf

1、目的：通過激活和抑制鼻咽癌CNE-1和CNE-2細(xì)胞中的RAC1/NADPH信號(hào)通路，探討RAC1/NADPH信號(hào)通路與鼻咽癌CNE-1和CNE-2細(xì)胞放射敏感性的關(guān)系以及化合物GXHSWAQ-4作為鼻咽癌放射增敏劑的潛在可能性。
　　方法：本研究以人鼻咽癌高分化鱗癌CNE-1和低分化鱗癌CNE-2細(xì)胞為研究對(duì)象，選擇PMA為RAC1激活劑，NSC23766為RAC1抑制劑，化合物GXHSWAQ-4為受試物，照射劑量為2 Gy,對(duì)

2、各組細(xì)胞進(jìn)行不同處理后，測(cè)定下列各項(xiàng)指標(biāo)：
　　1、 RAC1-GTPpulldownassay檢測(cè)各組細(xì)胞中RAC1-GTP蛋白的表達(dá)；
　　2、蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測(cè)照射前后各組細(xì)胞RAC1/NADPH信號(hào)通路中RAC1、p47和p67總蛋白以及下游JNK/AP-1信號(hào)通路中p38、phospho-p38、AP-1、phospho-AP-1、JNK1/2和phospho-JNK蛋白的表達(dá)水平的變化

3、；
　　3、免疫熒光法觀測(cè)各組細(xì)胞RAC1的分布和定位；
　　4、 NBT法檢測(cè)各組細(xì)胞中NADPH氧化酶活性的變化；
　　5、流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞中ROS濃度和細(xì)胞的凋亡率；
　　6、 MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞的存活分?jǐn)?shù)；
　　結(jié)果：1、PMA作用濃度為100 nmol.L-1，作用時(shí)間30 min，對(duì)NADPH氧化酶活性的激活效果最好；NSC23766作用濃度為25μmol.L-1，作用時(shí)間1 h，對(duì)NA

4、DPH氧化酶活性的抑制效果最佳。
　　2、PMA或PMA結(jié)合照射處理組，與空白組或單獨(dú)照射組相比，CNE-1和CNE-2細(xì)胞中的RAC1-GTP蛋白表達(dá)增加；RAC1蛋白活化并轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜上；總蛋白p47、p67和RAC1的表達(dá)增加；JNK/AP-1信號(hào)通路磷酸化phospho-p38、phospho-AP-1和phospho-JNK蛋白的表達(dá)增加；細(xì)胞中NADPH氧化酶的活性增加；ROS濃度增加；細(xì)胞凋亡率增加。NSC23766

5、的作用結(jié)果則與PMA相反。上述大部分指標(biāo)在CNE-1細(xì)胞中的變化程度大于CNE-2細(xì)胞。
　　3、化合物GXHSWAQ-4聯(lián)合照射處理后，與單獨(dú)照射組比較，CNE-1和CNE-2細(xì)胞中的RAC1-GTP蛋白表達(dá)增加；p67和RAC1總蛋白的表達(dá)增加；JNK/AP-1信號(hào)通路磷酸化phospho-p38，phospho-AP-1和phospho-JNK蛋白的表達(dá)增加；細(xì)胞中NADPH氧化酶的活性、ROS濃度以及細(xì)胞凋亡率均增加。

6、r>　　結(jié)論：1、PMA和NSC23766能有效激活和抑制鼻咽癌CNE-1和CNE-2細(xì)胞中RAC1-GTP的活性，從而調(diào)控RC1/NADPH信號(hào)通路。
　　2、調(diào)控RAC1/NADPH信號(hào)通路可影響下游JNK/AP-1信號(hào)通路的變化，從而改變鼻咽癌CNE-1和CNE-2細(xì)胞的輻射敏感性。且對(duì)鼻咽癌CNE-1細(xì)胞影響大于CNE-2細(xì)胞。
　　3、化合物GXHSWAQ-4聯(lián)合照射后能增加鼻咽癌CNE-1和CNE-2細(xì)胞的輻射敏