人鼻咽癌耐順鉑細(xì)胞系的放射敏感性研究.pdf

1、背景和目的
　　鼻咽癌是中國南部和東南亞地區(qū)最常見的惡性腫瘤之一,對(duì)放射治療和化療均比較敏感,早期鼻咽癌治療首選放射治療,而晚期或已經(jīng)發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的鼻咽癌需要聯(lián)合放化療。然而目前鼻咽癌的治療效果仍然不能令人滿意,這在很大程度上是由于腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生了多藥耐藥性(multidrug resistance, MDR)而使很多晚期病人最終死于化療失敗。順鉑(cisplation,CDDP)在鼻咽癌治療中最常作為一種化療藥物或放療增敏劑使用,

2、順鉑的獲得性耐藥常常導(dǎo)致臨床治療失敗。近年來,新的化療藥物顯示了明顯的單藥活性,如紫杉醇(Paclitaxel),吉西他濱(gemcitabine)等。紫杉醇主要用于一線治療,而吉西他濱很有希望會(huì)成為鼻咽癌的二線治療藥物。特別是首程含順鉑的治療后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的患者,再用順鉑為基礎(chǔ)的化療療效欠佳。本實(shí)驗(yàn)中我們探討人鼻咽低分化鱗癌細(xì)胞株及其耐順鉑細(xì)胞株的放射敏感性特征,以及順鉑對(duì)親代和耐藥細(xì)胞的增敏差異,并初步研究吉西他濱對(duì)耐藥細(xì)胞的增敏作用

3、及其增敏機(jī)制。
　　方法
　　以穩(wěn)定生長(zhǎng)于1ug/ml順鉑的人鼻咽癌順鉑耐藥細(xì)胞株 HNE1/CDDP及其親代細(xì)胞系HNE1為體外研究對(duì)象。第一部分:克隆形成法檢測(cè)順鉑對(duì)兩種細(xì)胞的毒性,并求出半數(shù)抑制濃度 IC50。實(shí)驗(yàn)分為單純照射組和照射加藥組,藥物為順鉑1ug/ml。應(yīng)用克隆形成方法,觀察單純照射和照射加藥物對(duì)細(xì)胞的殺傷作用,用radiomed軟件進(jìn)行曲線擬合作圖。第二部分:克隆形成法測(cè)定吉西他濱對(duì)人鼻咽癌低分化鱗癌親代

4、及耐藥株的毒性,并求出IC50;細(xì)胞生長(zhǎng)曲線和克隆形成實(shí)驗(yàn)探討低濃度吉西他濱的細(xì)胞毒性;免疫組織化學(xué)觀察吉西他濱對(duì)p53、bax、bcl-2基因表達(dá)的影響;末端脫氧核苷酰轉(zhuǎn)移酶法(TUNEL法)檢測(cè)細(xì)胞凋亡;流式細(xì)胞術(shù)觀察吉西他濱對(duì)細(xì)胞周期分布的影響;克隆形成法觀察吉西他濱對(duì)鼻咽癌順鉑耐藥細(xì)胞的放射敏感性影響。
　　結(jié)果
　　第一部分:HNE1在CDDP作用1小時(shí)下IC50=8.86±1.95ug/ml,HNE1/CDDP在

5、順鉑作用1小時(shí)下IC50=27.12±3.7ug/ml。HNE1和HNE1/CDDP受放射后的D0值分別為0.8593Gy和0.8757Gy。HNE1的單純照射組和照射加藥(CDDP)組D0值分別為0.8593Gy和0.7152Gy,增敏比是1.2015;HNE1/CDDP單純照射組和照射加藥(CDDP)組D0值分別為0.8757Gy和0.9298Gy,增敏比是0.9418;
　　第二部分:HNE1在吉西他濱作用下IC50=1.3

6、±0.1 ug/ml,HNE1/CDDP的吉西他濱作用下IC50=1.9±0.2 ug/ml,1.5ug/ml吉西他濱作用24小時(shí)對(duì)鼻咽癌耐藥株HNE1/CDDP有輕度的細(xì)胞毒性。吉西他濱作用后細(xì)胞凋亡增加,bax表達(dá)上調(diào), p53沒有明顯變化,藥物作用前后 bcl-2表達(dá)均呈陰性。并且使腫瘤細(xì)胞周期阻滯在 G1期,而 S期細(xì)胞比例則明顯減少。HNE1/CDDP單純照射組和照射加藥(吉西他濱)組D0值分別為0.8757Gy和0.6350

7、Gy,增敏比是1.3791。
　　結(jié)論
　　1、人鼻咽低分化鱗癌耐順鉑細(xì)胞株HNE1/CDDP對(duì)CDDP呈低度耐藥,對(duì)吉西他濱也呈低度耐藥;
　　2、 HNE1/CDDP對(duì)順鉑和放射線沒有交叉抵抗;
　　3、順鉑對(duì)HNE1具有明顯的放射增敏作用,但是順鉑對(duì)HNE1/CDDP細(xì)胞株失去了放射增敏作用;
　　4、吉西他濱對(duì)HNE1/CDDP細(xì)胞株具有放射增敏作用;
　　5、低濃度吉西他濱對(duì)耐順鉑細(xì)胞系(H