RNA干擾抑制小鼠CCR3基因?qū)w內(nèi)外嗜酸性粒細(xì)胞影響的作用研究.pdf

1、分類號分類號：密級密級：UDC：學(xué)號學(xué)號：406521511268南昌大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文RNA干擾抑制小鼠干擾抑制小鼠CCR3基因?qū)w內(nèi)外基因?qū)w內(nèi)外嗜酸性粒細(xì)胞影響的嗜酸性粒細(xì)胞影響的作用研究作用研究DetectionofeosinophilsexvivoinvivobysilencingmurineCCR3geneviaRNAinterference張皓培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院指導(dǎo)教師姓名：劉月輝教授主任醫(yī)師專業(yè)

2、學(xué)位種類：醫(yī)學(xué)專業(yè)領(lǐng)域名稱：耳鼻咽喉頭頸外科學(xué)論文答辯日期：2014年5月答辯委員會主席：張劍評閱人：盲審2014年5月摘要II摘要目的：目的：RNAi干擾下調(diào)小鼠CCR3基因的表達(dá)，在體內(nèi)和體外觀察嗜酸性粒細(xì)胞（eosinophil，EOS）的變化情況，為闡明過敏性鼻炎的發(fā)生機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。方法：方法：體外培養(yǎng)并純化小鼠來源的EOS，用細(xì)胞染色法進(jìn)行細(xì)胞鑒定。通過磷酸鈣沉淀法，將體外合成的特異性CCR3shRNA重組慢病毒載體轉(zhuǎn)染到

3、EOS中。用RTPCR和WesternBlot蛋白印跡法檢測慢病毒載體顆粒的抑制效果，AnnexinVFITC凋亡檢測法（(AnnexinVFITCApoptosisDetection）進(jìn)行流式細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測EOS凋亡情況。變應(yīng)性鼻炎小鼠鼻腔局部分組注入慢病毒載體處理后，RTPCR和WesternBlot蛋白印跡法檢測各組小鼠的骨髓、外周血及鼻腔黏膜中EOS的CCR3基因mRNA及蛋白的表達(dá)變化情況。流式細(xì)胞表面抗原直接標(biāo)記法檢測CD34

4、細(xì)胞的變化情況。結(jié)果：結(jié)果：（1）RTPCR和WesternBlot表明CCR3shRNA重組慢病毒處理的EOS的CCR3基因在mRNA和蛋白水平表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）。（2）流式細(xì)胞凋亡術(shù)表明CCR3shRNA能夠抑制EOS生長并促進(jìn)細(xì)胞凋亡，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）。（3）在小鼠骨髓、外周血、鼻腔黏膜中，CCR3shRNA處理組的CCR3基因的mRNA及蛋白表達(dá)低于PBS治療對照及shRNA治療對照組，差異有

5、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）。（4）CCR3shRNA處理組的CD34細(xì)胞數(shù)與PBS對照及shRNA治療組相比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。結(jié)論：結(jié)論：RNAi干擾下調(diào)基因CCR3的表達(dá)，在細(xì)胞培養(yǎng)和變應(yīng)性鼻炎動物模型中能有效的影響CCR3基因mRNA和蛋白水平的表達(dá)，同時能促進(jìn)EOS凋亡。小鼠體內(nèi)注入CCR3shRNA重組慢病毒能有效抑制EOS在局部組織的遷移及浸潤。關(guān)鍵詞：關(guān)鍵詞：嗜酸性粒細(xì)胞；CCR3；RNA干擾；細(xì)胞凋亡；CD