RNA干擾UL27基因?qū)Β蛐蛦渭儼捳畈《驹谛∈篌w內(nèi)復(fù)制的影響.pdf

1、目的：將構(gòu)建的UL27shRNA質(zhì)粒表達載體轉(zhuǎn)入BALB/c雌性小鼠生殖器皰疹(GH)動物模型體內(nèi)，評價UL27shRNA質(zhì)粒對GH小鼠模型的療效。
　　方法：陰道栓塞注射法制備BALB/c雌性小鼠GH動物模型。選取GH模型小鼠30只，分為三組，每組10只。UL27shRNA作為治療組，shRNA空載體作陰性對照組，采用脂質(zhì)體lipofectamine2000作為轉(zhuǎn)染試劑，轉(zhuǎn)染500 pmol UL27shRNA或shRNA空載體

2、至小鼠陰道上皮。脂質(zhì)體懸液作空白對照組，間隔4小時給藥,每天3次,連續(xù)給藥7天，第3、5、7天記錄小鼠外陰病變程度的評分，給完藥后解剖小鼠進行療效觀察。解剖前棉簽蘸取陰道分泌物，終點滴定法測定病毒滴度，HE染色技術(shù)觀察小鼠陰道組織形態(tài)學(xué)上的病理變化，實時熒光定量PCR檢測UL27基因mRNA的表達水平，Western blot分析UL27基因表達的gB蛋白水平。
　　結(jié)果：⑴陰道栓塞注射法轉(zhuǎn)染0.1ml TCID5010-5的HS

3、V-2病毒株至小鼠陰道上皮后，外陰出現(xiàn)紅腫且分泌物增多,病理學(xué)檢測有表皮內(nèi)水皰，細胞內(nèi)水腫。⑵給藥第3天開始，UL27shRNA治療組外陰病變程度評分明顯低于shRNA空載體組和空白對照組（P<0.05），而shRNA空載體組評分與空白對照組相比無明顯降低（P>0.05）。⑶UL27shRNA治療組病毒滴度與shRNA空載體組和空白對照組相比有顯著下降（P<0.05），而 shRNA空載體組和空白對照組相比無明顯差異（P>0.05）。⑷

4、病理學(xué)觀察顯示經(jīng)UL27shRNA治療的GH小鼠與shRNA空載體組和空白對照組相比能有效抑制炎性細胞的侵潤，shRNA空載體組和空白對照組相比抑制炎性細胞侵潤效果不明顯。⑸實時熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示UL27shRNA治療組的mRNA表達抑制率為37.28％，比 shRNA空載體組的6.26％和空白對照組的抑制效果明顯（P<0.05），shRNA組與空白對照組相比抑制效果不明顯（P>0.05）。⑹Western blot檢測結(jié)果顯示