野鴿皰疹病毒的分離鑒定及UL27基因生物信息學(xué)分析.pdf

1、禽皰疹病毒感染廣泛存在于多種鳥類之中，能引起雞、鴨等禽類感染。目前，禽皰疹病毒的感染呈現(xiàn)多樣化，不再局限于家禽體內(nèi)，在鴿子體內(nèi)也發(fā)現(xiàn)感染。自然感染野鴿臨床表現(xiàn)為厭食、精神不振、結(jié)膜炎;剖檢可見上呼吸道發(fā)炎，嚴(yán)重者潰瘍，肝臟、脾臟、腎臟及胰臟壞死，肝臟表面可見小的壞死點(diǎn);組織病理學(xué)檢查顯示肝細(xì)胞內(nèi)可見核內(nèi)包涵體，肝臟、腎臟、脾臟及胰臟大量壞死和炎癥細(xì)胞浸潤。鴿子是我國主要的經(jīng)濟(jì)動(dòng)物之一，皰疹病毒對(duì)養(yǎng)鴿業(yè)造成較為嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。鴿皰疹病毒（

2、Pigeonherpesvirus，PiHV）又稱哥倫比亞皰疹?、裥停–olumbid herpesvirus1，CoHV-1），屬于禽皰疹病毒科甲型皰疹病毒亞科馬立克氏病毒屬成員。
　　該病首次爆發(fā)于1945年，目前已在世界范圍內(nèi)流行，成為危害養(yǎng)鴿業(yè)發(fā)展的主要傳染病之一。2013年，康達(dá)畜禽咨詢服務(wù)中心收到黑龍江省內(nèi)的患病野鴿子病例。本研究通過對(duì)自然發(fā)病野鴿的流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀觀察、以及病毒的分離純化和理化特性檢驗(yàn)、動(dòng)物回歸

3、試驗(yàn)和基因檢測分析證明該病病原為CoHV-1。這是我國首次在野鴿（Columba livia f.dom）中成功分離得到CoHV-1。UL27基因編碼的gB蛋白是皰疹病毒感染過程中的主要囊膜糖蛋白。因此，研究鴿皰疹病毒UL27基因?qū)ζ浞肿由飳W(xué)功能意義重大，同時(shí)對(duì)臨床上診斷、預(yù)防鴿皰疹病毒及其基因工程疫苗起著指導(dǎo)作用。本研究以CoHV-1-HLJ基因組為模板，設(shè)計(jì)簡并引物，并結(jié)合步移PCR的技術(shù)，獲得了CoHV-1-HLJ UL25、U

4、L26、UL27基因序列，DNA序列分析得到的對(duì)應(yīng)的開放閱讀框（ORF）大小分別為1755bp、2328bp、2788bp;編碼的氨基酸(aa)個(gè)數(shù)分別為584aa、775aa、995aa; UL27基因序列提交GenBank對(duì)應(yīng)的登陸號(hào)為:KU051711。分析CoHV-1-HLJ gB蛋白抗原性，在gB蛋白胞外區(qū)抗原性較好的區(qū)域設(shè)計(jì)一對(duì)引物，克隆到表達(dá)載體pET28a(+)中，構(gòu)建重組質(zhì)粒pET28a-CoHV-gB，將陽性重組質(zhì)粒

5、轉(zhuǎn)化到感受態(tài)BL21(DE3)中，得到大量的以包涵體形式表達(dá)的目的蛋白，SDS-PAGE可見蛋白大小約為37.5 kDa。重組蛋白能夠與本實(shí)驗(yàn)室制備的兔抗CoHV-1-HLJ病毒粒子免疫血清發(fā)生特異性反應(yīng)。
　　綜上所述，本研究為國內(nèi)首次從野鴿（家養(yǎng)鴿子野外馴化）體內(nèi)分離出一株鴿源皰疹病毒CoHV-1-HLJ，CoHV-1-HLJ感染鴿子后，臨床上表現(xiàn)為呼吸抑制和結(jié)膜炎，解剖病理變化為肝臟、腎臟、脾臟及胰臟壞死及感染臟器內(nèi)（肝臟）