枇杷組織培養(yǎng)及SS基因生物信息學(xué)分析.pdf

1、枇杷是我國(guó)南方特色水果,目前品種優(yōu)化仍以傳統(tǒng)方法為主,時(shí)間長(zhǎng),工作量大,且限制了很多研究所需的生物技術(shù)方法的使用,故需通過(guò)組織培養(yǎng)技術(shù)為枇杷品種改良提供分子改良新途徑。通過(guò)組織培養(yǎng)建立穩(wěn)定的再生體系,并找到具有特定功能的目的基因是分子改良得以實(shí)施的前提。
　　本文主要以寧海白枇杷葉片、成熟胚等為材料,探索了培養(yǎng)基配方、消毒方法、光照、溫度等對(duì)枇杷組織培養(yǎng)的影響,為建立一套穩(wěn)定的枇杷再生系統(tǒng)提供基礎(chǔ);同時(shí)利用NCBI、DNAMAN、

2、MEGA5.0等分析軟件對(duì)RNA-seq測(cè)序獲得的若干SS基因序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析,為枇杷糖代謝相關(guān)基因的研究及更深入的果實(shí)品質(zhì)形成機(jī)理研究奠定基礎(chǔ),為枇杷新品種選育提供新途徑。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1.在不同消毒方法處理中,10％的次氯酸鈉溶液分步消毒15min能較好的減少褐化率和污染率。在光照處理實(shí)驗(yàn)中,暗處理20 d能提高葉片愈傷質(zhì)量,但對(duì)成熟胚的愈傷形成無(wú)明顯促進(jìn)作用。切割后暗處理的胚種子轉(zhuǎn)入光下會(huì)轉(zhuǎn)綠。
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3、.以不同成熟度葉片為外植體進(jìn)行培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)中等成熟的葉片誘導(dǎo)愈傷效果最好。2,4-D對(duì)枇杷葉片愈傷的形成有重要的作用。愈傷誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基為MS+0.5mg/L2,4-D+0.5mg/L6-BA,其誘導(dǎo)率為84.2%,培養(yǎng)溫度為25±2℃,過(guò)高會(huì)導(dǎo)致組織褐化。
　　3.以成熟胚為外植體進(jìn)行愈傷培養(yǎng),采用不同切割方法進(jìn)行接種,發(fā)現(xiàn)在適宜培養(yǎng)條件下都能誘導(dǎo)出綠色致密具有顆粒狀突起的愈傷。成熟胚橫切,胚芽端無(wú)刻傷能正常萌發(fā)植株,傷口處則產(chǎn)生

4、愈傷。MS+0.8mg/L2,4-D+0.4mg/L6-BA+0.4 mg/L NAA為胚愈傷誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基,誘導(dǎo)率分別為86.8%,最適培養(yǎng)溫度為25±2℃。
　　4.一定濃度的TDZ和NAA作用能直接刺激外植體萌發(fā)叢生芽。MS+1.0mg/L TDZ+0.4 mg/L NAA能促進(jìn)外植體包括胚芽端生長(zhǎng)點(diǎn)、無(wú)菌苗側(cè)枝等直接萌發(fā)不定芽,平均每外植體再生芽數(shù)為5。愈傷組織再分化獲得再生植株實(shí)驗(yàn)中,由愈傷誘導(dǎo)不定芽困難,目前僅獲得一些

5、類(lèi)根組織,這可能與不定芽誘導(dǎo)配方不適宜有關(guān)。
　　5.利用NCBI、DNAMAN、MEGA5.0等分析軟件對(duì)RNA-seq測(cè)序獲得的SS基因序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析,共獲得6條不同的枇杷SS基因序列,他們之間同源性達(dá)95%;序列分析顯示,6個(gè)SS序列均含有完整的開(kāi)放性閱讀框,可編碼807個(gè)氨基酸,蛋白分析顯示,它們是非跨膜的親水性蛋白,無(wú)信號(hào)肽,二級(jí)結(jié)構(gòu)以α-螺旋為主,含多個(gè)可能的功能模體;蛋白保守域預(yù)測(cè)其上有2個(gè)功能保守域,分別是