鉛對大腦內(nèi)質網(wǎng)RyRs與[3H]ryanodine結合的研究.pdf

1、目的：
　　鉛作為廣泛分布于環(huán)境中的有毒金屬，與鈣同為二價金屬，被認為模擬或干擾了鈣依賴性生化過程并引起機體以神經(jīng)系統(tǒng)為主的多系統(tǒng)損害。實驗室前期基礎表明，鉛能夠通過 RyRs引起海馬神經(jīng)元內(nèi)靜息鈣離子濃度增加。那么，鉛是否直接對RyRs通道開放有作用，如何作用，不得而知。為此，本研究將通過受體配體結合檢測鉛對大腦內(nèi)質網(wǎng)[3H]ryanodine結合的影響，進而研究鉛對RyRs通道開放功能的影響。
　　方法：
　　（1

2、）成年大鼠麻醉后直接斷頭取出大腦并運用裂解液進行勻漿。
　?。?）采用密度梯度超高速離心法提取大鼠大腦內(nèi)質網(wǎng)并通過透射電子顯微鏡和蛋白印跡（Western Blotting）對內(nèi)質網(wǎng)的提取效果和成分進行鑒定。
　　（3）放射性受體配體結合實驗研究：A.鉛對大腦內(nèi)質網(wǎng)[3H]ryanodine結合影響，包括劑量反應關系和時間反應關系；B.鉛和鈣的相互作用對[3H]ryanodine結合的影響；C.鉛和RyRs其他調(diào)節(jié)劑的相互作

3、用對[3H]ryanodine結合的影響。結果：
　?。?）提取的內(nèi)質網(wǎng)中同時含有粗面內(nèi)質網(wǎng)和滑面內(nèi)質網(wǎng)并均表達 RyR2、RyR3和內(nèi)質網(wǎng)標記蛋白GRP78。
　　（2）[Pb2+]f在0~100μM范圍內(nèi)時，鉛離子呈“V”型抑制了[3H]ryanodine結合。
　　（3）0.39μM鉛離子的存在使鈣依賴的[3H]ryanodine結合水平總體被抑制，但鉛對鈣濃度依賴曲線的抑制作用不具有濃度依賴性；鈣離子濃度的存在