鉛對(duì)大腦內(nèi)質(zhì)網(wǎng)RyRs與[3H]ryanodine結(jié)合的研究.pdf

1、目的：
　　鉛作為廣泛分布于環(huán)境中的有毒金屬，與鈣同為二價(jià)金屬，被認(rèn)為模擬或干擾了鈣依賴性生化過(guò)程并引起機(jī)體以神經(jīng)系統(tǒng)為主的多系統(tǒng)損害。實(shí)驗(yàn)室前期基礎(chǔ)表明，鉛能夠通過(guò) RyRs引起海馬神經(jīng)元內(nèi)靜息鈣離子濃度增加。那么，鉛是否直接對(duì)RyRs通道開(kāi)放有作用，如何作用，不得而知。為此，本研究將通過(guò)受體配體結(jié)合檢測(cè)鉛對(duì)大腦內(nèi)質(zhì)網(wǎng)[3H]ryanodine結(jié)合的影響，進(jìn)而研究鉛對(duì)RyRs通道開(kāi)放功能的影響。
　　方法：
　?。?

2、）成年大鼠麻醉后直接斷頭取出大腦并運(yùn)用裂解液進(jìn)行勻漿。
　?。?）采用密度梯度超高速離心法提取大鼠大腦內(nèi)質(zhì)網(wǎng)并通過(guò)透射電子顯微鏡和蛋白印跡（Western Blotting）對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的提取效果和成分進(jìn)行鑒定。
　　（3）放射性受體配體結(jié)合實(shí)驗(yàn)研究：A.鉛對(duì)大腦內(nèi)質(zhì)網(wǎng)[3H]ryanodine結(jié)合影響，包括劑量反應(yīng)關(guān)系和時(shí)間反應(yīng)關(guān)系；B.鉛和鈣的相互作用對(duì)[3H]ryanodine結(jié)合的影響；C.鉛和RyRs其他調(diào)節(jié)劑的相互作

3、用對(duì)[3H]ryanodine結(jié)合的影響。結(jié)果：
　　（1）提取的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中同時(shí)含有粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)并均表達(dá) RyR2、RyR3和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)標(biāo)記蛋白GRP78。
　?。?）[Pb2+]f在0~100μM范圍內(nèi)時(shí)，鉛離子呈“V”型抑制了[3H]ryanodine結(jié)合。
　　（3）0.39μM鉛離子的存在使鈣依賴的[3H]ryanodine結(jié)合水平總體被抑制，但鉛對(duì)鈣濃度依賴曲線的抑制作用不具有濃度依賴性；鈣離子濃度的存在