能量可控陡脈沖對惡性腫瘤凋亡和增殖影響的實驗研究.pdf

1、陡脈沖電場對細胞膜的不可逆性擊穿導(dǎo)致腫瘤細胞死亡的原理使其有可能成為惡性腫瘤低創(chuàng)或微創(chuàng)物理治療的新方式，而經(jīng)陡脈沖處理后，處理中心邊緣的腫瘤細胞(即：處理旁中心區(qū)域)增殖活性是影響陡脈沖治療效果的重要因素。本課題采用能量可控陡脈沖(energycontrollablesteeppulse，ECSP)對在體腫瘤模型和體外培養(yǎng)腫瘤細胞進行處理，探討能量可控陡脈沖對處理旁中心區(qū)域的腫瘤組織增殖和凋亡的影響，以及影響腫瘤細胞增殖活性的可能機制，

2、為臨床試驗提供理論依據(jù)。 第一部分 能量可控陡脈沖對兔VX2乳腺癌增殖和凋亡的影響 目的：觀察能量可控陡脈沖對荷瘤兔乳腺癌細胞增殖能力和凋亡的影響，分析陡脈沖治療惡性腫瘤可能的機制以及對處理旁中心區(qū)域腫瘤組織潛在的影響。 方法：建立兔gx2乳腺癌移植瘤模型，將24只荷瘤兔隨機分為兩組，ECSP處理組(n=21)和對照組(n=3)，移植瘤經(jīng)能量可控陡脈沖處理，分別于處理后O、12、24、48、72、120、168小

3、時取腫瘤組織，分別通過蘇木素一伊紅(Haematoxylinandeosin，HE)染色、TUNEL(Terminaldeoxynucleotidyltransferase-mediateddUTPnick-end-labelling，TUNEL)法、免疫組織化學(xué)染色檢測增殖細胞核抗原(Proliferatingcellnuclearantigen，PCNA)的表達，觀察處理中心組織及處理旁中心區(qū)域細胞形態(tài)、腫瘤細胞凋亡及增殖細胞核抗原

4、表達的改變，并分別計算處理前后腫瘤組織凋亡指數(shù)(Apoptoticindex，AI)和細胞增殖指數(shù)(ProliferateIndex，PI)的改變。 結(jié)果：處理組經(jīng)陡脈沖處理后腫瘤組織中心發(fā)生凝固性壞死，旁中心區(qū)域有大量凋亡細胞，中心部分凋亡細胞較少；處理前對照組標本中僅見少量TUNEL陽性細胞，處理組與處理前對照組比較，凋亡指數(shù)差異具有顯著性(P<0．05)。在處理后不同的時間點觀察，處理組的細胞凋亡高峰在24小時左右，以后逐

5、漸下降。在處理組中，增殖細胞核抗原在各時間點的表達均顯著下降，且隨時間的延長表達逐漸降低，在168小時后處理組僅見散在的弱陽性細胞表達，處理組與處理前對照組相比，增殖指數(shù)差異具有顯著性。 結(jié)論：能量可控陡脈沖能夠通過誘導(dǎo)處理旁中心區(qū)域腫瘤細胞凋亡，抑制腫瘤細胞增殖，擴大陡脈沖處理的有效范圍，促進腫瘤細胞在原位滅活。 第二部分 能量可控陡脈沖抑制乳腺癌細胞增殖活性的機制初探 目的：觀察能量可控陡脈沖對乳腺癌細胞增殖

6、的抑制作用以及相關(guān)基因的表達的影響，探討能量控陡脈沖抑制腫瘤細胞增殖的可能機制。 方法：應(yīng)用能量可控陡脈沖作用于人乳腺癌細胞系MDA-MB-231，于陡脈沖作用后24小時應(yīng)用RT-RCR方法分別測定ECSP組和對照組中抑癌基因Rb基因及轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子E2Fi表達的改變。 結(jié)果：陡脈沖對乳腺癌細胞的增殖有明顯抑制作用，與對照組相比ECSP組細胞數(shù)目明顯減少。ECSP組Rb基因mRNA表達明顯升高、E2FlmRNA表達明顯下降