順序注射微流控焦磷酸測序系統(tǒng)的改進及其應用.pdf

1、DNA序列測定技術是現(xiàn)代生命科學研究的核心技術之一。與傳統(tǒng)Sanger法相比，焦磷酸測序技術是一種實時的DNA測序技術，具有快速、高效、成本低的特點。現(xiàn)有的焦磷酸測序系統(tǒng)的發(fā)展主要有兩種趨向:一種是針對大規(guī)模測序的高通量系統(tǒng)，另一種是針對床邊檢測的便攜式的系統(tǒng)。本文在已有研究的基礎上對基于磁珠微反應器的微流控焦磷酸測序系統(tǒng)進行了改進，并初步用于甲型流感病毒H1N1MP基因的分型和單核苷酸多態(tài)性檢測。
　　首先利用導磁片誘導永磁鐵加

2、磁的方法將表面固載化學反應基團的磁珠固定在毛細管內形成流動微反應器，通過周期性改變毛細管與導磁片之間的距離的方法使磁珠在反應器中進行強制攪拌運動，使流動液固反應的效率得到有效改進。此流動微反應器的制作方法簡單，不涉及任何微加工。通過改變磁場很容易進行磁珠的固定、攪拌及更換操作，微反應器可以實現(xiàn)重復利用，與順序注射相結合成為通用性好的微流控流動分析平臺。
　　其次，基于如上方法制作的流動微反應器，以注射泵為動力，微弱化學發(fā)光儀做為檢

3、測器，結合縫管陣列方法順序引入試劑，建立了微型流動焦磷酸測序系統(tǒng)。通過向三酶系統(tǒng)的反應液中加入apyrase的方法使背景信號大大降低。利用所建立的系統(tǒng)對反應條件進行了系統(tǒng)研究，成功測定了人工合成DNA單鏈的28個堿基序列，并用于甲型流感病毒H1N1 MP基因的序列測定和SNP位點的檢測，取得了與液相靜態(tài)焦磷酸測序方法一致的結果。
　　此微流控焦磷酸測序系統(tǒng)搭建及控制方法簡單、價格低廉、不需要微加工技術、易于實現(xiàn)自動化和便攜化，特別