焦磷酸測(cè)序技術(shù)在高危型HPV分型中應(yīng)用的研究.pdf

1、人乳頭瘤病毒(Human papillomavirlls,HPV)屬于乳多空病毒科的乳頭瘤病毒屬,HPV于1949年由Strauss在電鏡下發(fā)現(xiàn),是一種小的環(huán)狀雙鏈DNA病毒,其基因組長(zhǎng)度約8000bp。目前已經(jīng)確定的HPV亞型有100余種,依其感染的上皮所在部位分為皮膚型HPV和生殖道上皮型HPV,大約30多種型別可感染婦女生殖道,其中約20種與腫瘤相關(guān)。依據(jù)HPV不同亞型與腫瘤發(fā)生的危險(xiǎn)性高低分為低危險(xiǎn)型和高危險(xiǎn)型HPV,由于不同亞

2、型HPV的致病機(jī)制和致癌危險(xiǎn)性各不相同,因此對(duì)HPV各亞型進(jìn)行分型檢測(cè)有重要的臨床意義。目前,臨床上通過(guò)熒光實(shí)時(shí)PCR技術(shù)對(duì)HPV進(jìn)行分型檢測(cè),但該方法檢測(cè)通量低,難以滿足臨床上同時(shí)檢測(cè)多個(gè)亞型的需要,此外通過(guò)核酸雜交的方法檢測(cè)HPV亞型目前在臨床廣為應(yīng)用,但其假陰性和假陽(yáng)性較多,靈敏性和特異性有待提高。在分子診斷領(lǐng)域,最直接而明確的技術(shù)是基因測(cè)序,傳統(tǒng)的基因測(cè)序方法是通過(guò)Sanger終止法進(jìn)行的,該方法一次只能讀取單個(gè)基因的序列,而對(duì)

3、于有眾多基因亞型感染的疾病,很難獲得理想的測(cè)序結(jié)果。焦磷酸測(cè)序技術(shù)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種新的序列分析技術(shù),它通過(guò)核苷酸和模板結(jié)合后釋放的焦磷酸,引發(fā)酶的級(jí)聯(lián)反應(yīng),促使熒光素發(fā)光并進(jìn)行檢測(cè),其最大優(yōu)點(diǎn)是可以實(shí)現(xiàn)高通量、高效率并同時(shí)檢測(cè)多至5種以上亞型,對(duì)于當(dāng)前日益增多的混合型HPV感染無(wú)疑具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。 目的：探討利用焦磷酸測(cè)序技術(shù)同時(shí)檢測(cè)HPV多個(gè)高危亞型的方法,提高HPV及其混合型感染檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確度。