HBV在輔助生育技術(shù)中的傳播風險.pdf

1、目的：1.回顧性分析HBV在不孕夫婦中感染率，以初步評估HBV 對感染者生育能力的影響。
　　 2.探討HBV 感染對IVF-ET 妊娠結(jié)局的影響。
　　 3.檢測男方為HBV 攜帶者不孕夫婦廢棄胚胎是否存在HBV，以評估HBV經(jīng)精子垂直傳播的風險。
　　 4.檢測女方為HBV 攜帶者不孕夫婦卵母細胞及廢棄胚胎是否存在HBV，以明確HBV在IVF/ICSI、胚胎冷凍或贈卵中經(jīng)卵母細胞和胚胎傳播的風險。
　　

2、 5.定量檢測女性HBV 攜帶者血液及其卵泡液HBV DNA水平，分析二者的相關(guān)性。
　　 6.比較IVF周期與ICSI周期感染HBV的不孕夫婦卵母細胞及廢棄胚胎HBV陽性率，以探討ICSI周期HBV 傳播風險是否增加。
　　 7.研究卵母細胞及廢棄胚胎HBV 陽性率與血清標志物的關(guān)系，并探討ART是否增加HBV 垂直傳播的風險。
　　 方法：
　　 1.回顧性分析2008年1月至2008年12月在同濟

3、醫(yī)院生殖中心行IVF/ICSI治療的3457 對不孕夫婦中，女方HBsAg 陽性率、男方HBsAg 陽性率和夫妻雙方HBsAg 陽性率。
　　 2.2009年3月至2009年12月收集HBV 感染組研究對象共244 對夫婦，包括男方為HBV 攜帶者不孕夫婦130 對、女方為HBV 攜帶者不孕夫婦102 對和夫妻雙方均為HBV 攜帶者不孕夫婦12 對。對照組為2009年3月至2009年12月在同濟醫(yī)院生殖中心行IVF/ICSI治療

4、的未感染HBV的不孕夫婦。比較男方為HBV 攜帶者不孕夫婦、女方為HBV 攜帶者不孕夫婦、夫妻雙方均為HBV 攜帶者不孕夫婦與對照組未感染HBV 不孕夫婦的一般情況、超促排卵結(jié)果、胚胎著床率、流產(chǎn)率和臨床妊娠率。
　　 3.采用PCR法檢測男方為HBV 攜帶者不孕夫婦廢棄胚胎的HBV DNA，RT-PCR法檢測男方為HBV 攜帶者不孕夫婦廢棄胚胎的HBV RNA。
　　 4.采用PCR法檢測女方為HBV 攜帶者不孕夫婦未

5、受精卵母細胞和廢棄胚胎的HBV DNA，RT-PCR法檢測女方為HBV 攜帶者不孕夫婦未受精卵母細胞和廢棄胚胎的HBV RNA，免疫熒光法研究包含HBsAg的病毒顆粒在卵母細胞和胚胎的位置。
　　 5.實時熒光定量PCR法檢測女性HBV 攜帶者血液及其卵泡液HBV DNA水平，Spearman’s 相關(guān)系數(shù)評估二者的相關(guān)性。
　　 6.在檢測上述不孕夫婦未受精卵母細胞和/或廢棄胚胎基礎(chǔ)上，比較IVF周期與ICSI周期感染

6、HBV的不孕夫婦卵母細胞及廢棄胚胎HBV 陽性率。
　　 7.采用放射免疫法檢測HBV 感染標志物。
　　 結(jié)果：
　　 1.在接受ART治療的不孕夫婦中，女方HBsAg 陽性率為7.95％ (275/3457),男方HBsAg 陽性率為12.61％ (436/3457)，夫妻雙方HBsAg 均陽性占1.19％（41/3457），HBV 總的感染率為21.75％（752/3457）。
　　 2.HBV 感

7、染組和對照組一般情況與超促排卵結(jié)果相似。女方為HBV 攜帶者的夫婦著床率、生化妊娠率和臨床妊娠率分別為19.9％、11.76％、30.39％，與對照組著床率（23.39％）、生化妊娠率（7.46％）和臨床妊娠率（33.56％）無顯著性差異；男方為HBV 攜帶者的夫婦著床率為17.17％，顯著低于對照組組著床率23.39％，男方為HBV 攜帶者的夫婦生化妊娠率和臨床妊娠率分別為6.15％和34.62％，與對照組生化妊娠率（7.46％）和臨

8、床妊娠率（33.56％）無顯著性差異；
　　 夫妻雙方均為HBV 攜帶者的夫婦著床率、生化妊娠率和臨床妊娠率分別為13.04％、0和25％，與對照組著床率（23.39％）、生化妊娠率（7.46％）臨床妊娠率（33.56％）無顯著性差異。
　　 3.18 對男方為HBV 慢性攜帶者不孕夫婦的84個廢棄胚胎行PCR法檢測，結(jié)果3 對（16.7％）夫婦廢棄胚胎陽性；13 對男方為HBV 慢性攜帶者不孕夫婦的52個廢棄胚胎行RT

9、-PCR檢測，結(jié)果9 對（69.2％）夫婦廢棄胚胎陽性。
　　 4.14 對女方為HBV 慢性攜帶者不孕夫婦的71個未受精卵母細胞、廢棄胚胎行PCR法檢測，結(jié)果3 對（21.4％）夫婦未受精卵母細胞、廢棄胚胎陽性；17對女方為HBV慢性攜帶者不孕夫婦的63個未受精卵母細胞、廢棄胚胎行RT-PCR檢測，結(jié)果8 對（47.1％）夫婦未受精卵母細胞、廢棄胚胎陽性；10 對女方為HBV 攜帶者夫婦的20個未受精卵母細胞及廢棄胚胎行免疫熒

10、光檢測，6 對夫婦的未受精卵母細胞及廢棄胚胎的細胞漿、細胞核處可見散在的綠色熒光信號。
　　 5.實時熒光定量PCR法檢測31 位女性HBV 攜帶者血液及其30 份卵泡液HBV DNA水平，結(jié)果女性HBV 攜帶者血液HBV DNA水平與卵泡液HBV DNA水平不相關(guān) (r=0.13，P=0.48)。
　　 6.31 對男方為HBV 攜帶者夫婦中，5對夫婦行ICSI，26 對夫婦行IVF，廢棄胚胎HBV DNA/RNA 陽

11、性率分別為40％(2/5)和38％(10/26)（P=1.00）。31 對女方為HBV 攜帶者夫婦中，8 對夫婦行ICSI，23 對夫婦行IVF，胚胎和卵母細胞HBV DNA/RNA 陽性率分別為13％（1/8）和43％（10/23），無統(tǒng)計學差異（P=0.20）。
　　 7.HBsAg 陽性母親新生兒的未受精卵母細胞和廢棄胚胎的陽性率為7.7％，HBsAg和HBeAg/HBV DNA雙陽性母親未受精卵母細胞和廢棄胚胎的陽性率介

12、于50％-100％。
　　 結(jié)論：
　　 1.不孕夫婦中HBV 總的感染率為21.75％，高于一般人群8％-10％的HBV感染率，初步提示HBV 可能影響感染者的生育能力。
　　 2.HBV 感染可能不影響IVF-ET 妊娠結(jié)局。
　　 3.人類精子可以作為載體將HBV 傳播給胚胎，并在胚胎復制和翻譯，從而為“HBV 可能經(jīng)精子垂直感染胚胎”的假設(shè)提供了直接的證據(jù)。
　　 4.HBV 也可以穿破人