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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
食物不耐受是一種復(fù)雜的變態(tài)反應(yīng)性疾病,它的發(fā)生與許多慢性疾病密切相關(guān)。然而,臨床現(xiàn)用食物不耐受特異性IgG檢測(cè)試劑價(jià)格昂貴、方法不靈活,限制了食物不耐受檢測(cè)項(xiàng)目的廣泛開展和臨床應(yīng)用。本研究旨在研制一種個(gè)性化食物特異性IgG檢測(cè)試劑盒,從而實(shí)現(xiàn)不同抗原的靈活選擇和隨機(jī)組合,將傳統(tǒng)的“套餐式”檢測(cè)模式,改進(jìn)為個(gè)性化的“訂單式”檢測(cè)模式;調(diào)查本地區(qū)普通人群5種常見食物的不耐受情況,并分析其發(fā)病率與年齡、性別的關(guān)系;以特異性I
2、gG抗體為識(shí)別“探針”,分析食物蛋白提取液中引起不耐受的蛋白組分,為食物不耐受患者進(jìn)行更有針對(duì)性的脫敏治療提供可靠依據(jù)。
方法:
1.個(gè)性化食物特異性IgG檢測(cè)試劑盒的研制:以日常生活中常見的5種食物為例,制備食物的蛋白提取液,經(jīng)SDS-PAGE分析其完整性;用長(zhǎng)臂活化生物素標(biāo)記食物蛋白,并用斑點(diǎn)印跡法檢測(cè)其免疫活性,將其作為已知抗原備用;制備生物素化牛血清白蛋白-鏈霉親和素酶標(biāo)反應(yīng)板,作為通用反應(yīng)板;通過條件優(yōu)化和
3、最適稀釋度的選擇,確定反應(yīng)的最佳條件;對(duì)所建立的方法進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià)和相關(guān)性分析。
2.本地區(qū)5種食物不耐受情況調(diào)查及不耐受組分分析:收集體檢人群的靜脈血,按受試者年齡,將其分為青年組(≤30歲)、中年組(31歲~49歲)和老年組(≥50歲)三個(gè)組別。用本實(shí)驗(yàn)建立的方法分析該人群對(duì)這5種食物的不耐受情況。用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0,對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,研究本地區(qū)食物不耐受與年齡和性別的關(guān)系。每種食物蛋白經(jīng)電泳、轉(zhuǎn)印后,用篩選出
4、的陰性和陽性單例血清分別做酶免疫印跡實(shí)驗(yàn),通過所得的抗體譜分析食物中的不耐受組分。
結(jié)果:
1.個(gè)性化食物特異性IgG檢測(cè)試劑盒的研制:5種食物蛋白經(jīng)SDS-PAGE鑒定蛋白成分完整,符合實(shí)驗(yàn)要求;斑點(diǎn)免疫印跡顯示,生物素化的食物蛋白具有良好的免疫原性,可用于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中;制備的通用酶標(biāo)反應(yīng)板可用于檢測(cè)不同的食物特異性IgG。優(yōu)化反應(yīng)條件,建立個(gè)性化食物特異性IgG檢測(cè)方法。最后,方法學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)果表明,該方法的批
5、內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于10%,食物間交叉反應(yīng)率均小于15%,標(biāo)準(zhǔn)曲線穩(wěn)定性較好,與臨床常用商品化試劑盒具有良好的相關(guān)性,r=0.961。
2.本地區(qū)5種食物不耐受情況調(diào)查及不耐受組分分析:本地區(qū)普通人群5種食物特異性IgG抗體總陽性率為81.07%,按陽性率高低依次排序?yàn)殡u蛋、牛奶、帶魚、蟹、蝦,其陽性率分別是58.82%、51.92%、36.38%、34.27%、25.06%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析,證明食物不耐受與年齡和性別存在
6、相關(guān)關(guān)系。相對(duì)于成年人,老年人和兒童更易患病。女性特異性IgG抗體陽性率(45.14%)高于男性(30.87%)。5種食物的不耐受組分反應(yīng)情況不同。蛋清中4種主要蛋白均參與食物不耐受的反應(yīng),不同個(gè)體間反應(yīng)情況基本相似;而牛奶、蝦、蟹和帶魚的蛋白成分較多,不耐受組分種類比較復(fù)雜,個(gè)體間的不耐受組分存在異質(zhì)性。
結(jié)論:
1.利用生物素-親和素系統(tǒng)制備的通用酶標(biāo)反應(yīng)板,可實(shí)現(xiàn)抗原包被過程與反應(yīng)過程的統(tǒng)一。并且此方法可根據(jù)待
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