水稻紋枯病菌毒素的提純、組分分析及鈍化.pdf

1、采用不同方法提取水稻紋枯病菌(Rhizoctonia solani)毒素。結果表明最佳提取方法為：將水稻紋枯病菌培養(yǎng)濾液于60℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至原體積的1/5，加等體積甲醇、離心去沉淀，60℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去甲醇。取水相加等體積的乙醚萃取3次，合并有機相，40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去乙醚，即得水稻紋枯病菌粗毒素。該粗毒素對水稻胚根的伸長有明顯抑制作用；以粗毒素針刺接種水稻葉鞘后，接種部位出現(xiàn)典型的紋枯病病斑。 不同方法提取的粗毒素具有相同的紫外吸收

2、曲線，吸收峰在220nm左右。粗毒素經(jīng)第1次Sephadex G-75硅膠柱層析，共收集43瓶洗脫液，主要活性成分集中在7~18瓶。將第1次層析后7~18瓶洗脫液同法進行第2次層析，共收集21瓶洗脫液，其中7～9瓶含活性成分最多。本研究將第2次層析后7~9瓶洗脫液定為精毒素。 對精毒素進行HPLC檢測，發(fā)現(xiàn)其至少有4個特異吸收峰，即可能含有4種活性組分。通過紅外光譜分析，該毒素可能含有N-H(或O-H)、C=O、C-N(或C-O

3、)基團。薄層色譜分析表明該毒素為糖類物質(zhì)。經(jīng)氣質(zhì)聯(lián)用進一步檢測發(fā)現(xiàn)該毒素含有葡萄糖、N-乙酰氨基甘露糖和蔗糖。同時表明該毒素不含苯甲酸、苯乙酸及其衍生物。 將9種化合物與病菌粗毒素按一定濃度(100、500和1000μg/ml)混合后，測定其對水稻胚根伸長的抑制率。結果表明，多種化合物對毒素具有顯著的鈍化作用，其中KMnO4鈍化率最大，達80％左右。對水稻葉鞘針刺接種顯示，KMnO4與毒素混合接種僅出現(xiàn)褐色斑，而未見枯白色壞死斑