甲胎蛋白陰性與陽性肝細(xì)胞癌臨床病理特征及基因表達譜差異研究.pdf

1、這一博士學(xué)位課題由兩部分研究工作構(gòu)成。
　　第一部分甲胎蛋白陰性與甲胎蛋白陽性肝細(xì)胞癌臨床病理特征及預(yù)后研究
　　目的:甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)對于肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)術(shù)后的預(yù)后價值尚存爭議，本論文研究肝細(xì)胞癌術(shù)前血清AFP水平的預(yù)后價值，同時分析不同AFP水平肝癌患者的臨床病理特征。
　　方法:應(yīng)用病例對照研究的方法，回顧性分析中國醫(yī)學(xué)科學(xué)

2、院腫瘤醫(yī)院251例接受手術(shù)治療的肝細(xì)胞癌患者的臨床病理資料，按術(shù)前血清AFP水平分組，以20ng/mL為截點值，分成AFP陰性組(0-20 ng/ml)和AFP陽性組(＞20 ng/ml)，其中AFP陰性組142例，AFP陽性組109例，比較兩組患者的臨床病理特征，采用Kaplan-Meier法計算生存率，以Log rank檢驗進行生存曲線比較，用Cox比例風(fēng)險回歸模型分析影響術(shù)后肝癌患者預(yù)后的相關(guān)因素。
　　結(jié)果:與AFP陰性肝

3、癌比較，AFP陽性組患者的血漿凝血酶原時間較長、肝被膜受侵比例較高、組織分化較差、巴塞羅那臨床肝癌分期較晚(P＜0.05)。女性肝癌患者術(shù)前AFP水平高于男性患者(P=0.04)。AFP陰性組患者1、3、5年無復(fù)發(fā)生存率為78.1％、57.5％和40.6％，高于AFP陽性組患者1、3、5年無復(fù)發(fā)生存率61.8％、37.7％和31.4％，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（Log rank檢驗，P=0.004）。AFP陰性組患者1、3、5年生存率為94.

4、4％、83.8％和62.3％，高于AFP陽性組患者1、3、5年生存率87.2％、60.0％和36.7％，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(Log rank檢驗，P＜0.001)。Cox多因素分析結(jié)果顯示，AFP、腫瘤直徑和Edmondson-Steiner分級是影響肝癌患者預(yù)后的獨立因素(P＜0.05)，與AFP陰性肝癌相比，AFP陽性肝癌術(shù)后死亡風(fēng)險增加了76.7％(OR=1.767，95％CI=1.108-2.816，P=0.017)。
　

5、　結(jié)論:AFP陽性組肝癌惡性程度高于AFP陰性組肝癌。女性肝癌患者術(shù)前AFP水平高于男性患者。術(shù)前血清AFP水平是判斷肝癌術(shù)后預(yù)后的重要因素。
　　第二部分甲胎蛋白陰性與甲胎蛋白陽性肝細(xì)胞癌基因表達譜差異研究
　　目的:肝細(xì)胞癌是具有不同臨床表現(xiàn)和分子生物學(xué)特征的異質(zhì)性疾病。本研究通過分析比較AFP陰性和AFP陽性肝癌的mRNA表達譜差異，結(jié)合臨床資料，發(fā)現(xiàn)一組可能具有肝癌診斷和預(yù)后判斷價值的分子標(biāo)志。
　　方法:采用

6、安捷倫4×44k基因芯片平臺，檢測合并乙肝病毒(hepatitis B virus，HBV)感染的20例AFP陰性和20例AFP陽性肝癌組織的mRNA表達譜，通過生物信息學(xué)分析，獲得差異表達基因。通過實時定量PCR(real time Quantiative PCR，real timePCR)和/或酶聯(lián)免疫吸附實驗(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)方法驗證部分差異表達基因。
　　結(jié)果

7、:通過表達譜芯片分析，在AFP陰性和AFP陽性肝癌組織中發(fā)現(xiàn)352個差異表達基因。主成分分析顯示，AFP陰性肝癌組織高表達基因62個，主要參與細(xì)胞凋亡和程序性死亡等過程，AFP陽性肝癌高表達基因290個，主要參與有絲分裂和細(xì)胞周期等過程。real time PCR檢測IFNGR1（interferon gamma receptor1，干擾素γ受體1）、LAMB3(lamininβ3，層連蛋白β3)、MFSD2A(major facili

8、tator superfamilydomain containing2A，促進調(diào)解蛋白超家族2A)、RASD1(dexamethasone-inducedRAS related protein1，類固醇誘導(dǎo)的RAS相關(guān)蛋白1)、STARD5(StAR-related lipidtransfer domain containing5，StAR關(guān)脂質(zhì)轉(zhuǎn)運蛋白5)和TRIM35(tripartite motifcontaining prote

9、in35，三結(jié)構(gòu)域蛋白35)等在AFP陰性肝癌組織高表達的6個基因，結(jié)果顯示LAMB3、MFSD2A、STARD5和TRIM35在AFP陰性肝癌組織中的表達高于AFP陽性肝癌組織。肝癌患者血漿MFSD2A濃度顯著高于健康人，對于肝癌具有良好的診斷效能，ROC曲線的AUC值為0.8353(95％CI:0.7486-0.9220)，敏感性為74.16％，特異度為89.47％。并且，對于AFP陰性肝癌同樣具有良好的診斷效能，AUC值為0.83